聚丙烯酸酯脂質(zhì)體復(fù)合微粒作為生物技術(shù)藥物載體的研究.pdf

1、生物技術(shù)藥物主要有蛋白類(lèi)藥物和基因治療藥物，這類(lèi)藥物分子量大，生物膜通透性差，在體內(nèi)易受酶的降解而導(dǎo)致生物利用度很低，使其應(yīng)用受到很大的限制，而陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為生物技術(shù)藥物載體具有高效、低毒、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)受到廣泛關(guān)注。
　　 本研究采用聚甲基丙烯酸酯季銨鹽修飾脂質(zhì)體制備聚丙烯酸酯脂質(zhì)體復(fù)合微粒（RL-LP），考察制備工藝和理化性質(zhì)，測(cè)定RL-LP對(duì)牛血清白蛋白（BSA）和存活素反義寡核苷酸（ASON）的結(jié)合效率，研究其對(duì)這兩種藥物

2、進(jìn)入細(xì)胞的促進(jìn)作用，并對(duì)細(xì)胞作用機(jī)制進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。
　　 本文首先采用溶劑-非溶劑法制備RL-LP，分別考察溫度、脂質(zhì)醇溶液滴加速度、RL/LP質(zhì)量比對(duì)粒徑和Zeta的影響，確定制備工藝為溫度55℃、RL/LP質(zhì)量比1:1、脂質(zhì)醇溶液直接注入。電鏡觀察RL-LP形態(tài)規(guī)整，幾乎呈球形，與同法制備的空白LP相比，RL-LP粒徑與聚分散指數(shù)變小，Zeta電位增大，穩(wěn)定常數(shù)變小。紅外吸收光譜顯示RL-LP較單獨(dú)RL和LP，沒(méi)有特征峰的出

3、現(xiàn)或消失，說(shuō)明RL與LP之間主要是通過(guò)疏水鍵等次級(jí)鍵的作用結(jié)合的。體外細(xì)胞毒性表明，RL-LP在HepG2、COS-7、L929腫瘤細(xì)胞中的毒性均低于單獨(dú)使用RL時(shí)的毒性。
　　 其次，本文考察RL-LP作為BSA載體的性能。用異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記BSA，制得1分子BSA結(jié)合2.34分子FITC的FITC-BSA。采用氯化鈣沉淀法考察RL-LP和BSA的結(jié)合率，結(jié)果顯示RL-LP與BSA的質(zhì)量比為10:1時(shí)，兩者的結(jié)合

4、率達(dá)98.6％。熒光顯微鏡下觀察RL-LP/FITC-BSA的細(xì)胞攝取，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)熒光廣泛分布，而游離FITC-BSA則只有微弱的熒光，表明RL-LP對(duì)BSA進(jìn)入細(xì)胞有明顯促進(jìn)作用。
　　 最后，本文以ASON為模型，考察RL-LP作為基因載體的可行性。采用直接混合孵育制備RL-LP/ASON復(fù)合物，瓊脂糖電泳測(cè)定RL-LP與ASON的結(jié)合率，結(jié)果顯示，當(dāng)N/P比超過(guò)4:1時(shí)，兩者完全結(jié)合。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明，RL-LP/ASON

5、在不同細(xì)胞中的攝取行為表現(xiàn)出較大的差異，在COS-7細(xì)胞中，胞內(nèi)熒光總量隨著RL-LP濃度的增加而增加，而在HepG2細(xì)胞中，胞內(nèi)熒光總量隨著RL-LP濃度的增加呈現(xiàn)出先增加后減小的趨勢(shì)，當(dāng)N/P比為4:1時(shí)，胞內(nèi)熒光總量最大。細(xì)胞攝取動(dòng)力學(xué)研究表明，當(dāng)RL-LP/ASON復(fù)合物與細(xì)胞共培養(yǎng)4h時(shí)，細(xì)胞攝取達(dá)到平衡。本文還研究了溫度、血清、RL-LP預(yù)處理和共培養(yǎng)對(duì)復(fù)合微粒細(xì)胞攝取行為的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4℃時(shí)RL-LP/ASON的攝取量