Notch-1基因與人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞自噬相關性的研究.pdf

1、目的：
　　觀察上調(diào)和下調(diào)Notch-1基因表達時人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的自噬現(xiàn)象，探討Notch-1基因參與人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞自噬的可能機制。
　　方法：
　　利用表達Notch1-shRNA和Notch-1胞內(nèi)段（Notch-1 intracellular domain, NICD）的慢病毒感染人膠質(zhì)瘤U251細胞，通過RT-PCR和Western Blotting法鑒定Notch-1表達下調(diào)或NICD表達上調(diào)的U251細

2、胞；應用單丹（磺）酰戊二胺（Monodansylcadaverine，MDC）染色法觀察細胞自噬現(xiàn)象；通過Western-blotting和細胞免疫染色法檢測自噬相關蛋白LC-3（microtubule-associated protein1 light chain3，微管相關蛋白1輕鏈3）和Beclin-1的表達情況。
　　結果：
　　Notch-1RNA干擾慢病毒能有效下調(diào)U251細胞Notch-1的表達，而NICD過表

3、達慢病毒能顯著上調(diào)U251細胞 NICD的表達；MDC熒光染色法發(fā)現(xiàn)， Notch-1下調(diào)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞中可觀察到點狀自噬囊泡（autophagic vacuoles，AVs），Western-blotting和細胞免疫染色法結果顯示，在Notch-1表達下調(diào)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞中，自噬相關蛋白LC-3和Beclin-1表達增高。
　　結論：
　　Notch-1表達下調(diào)的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞可觀察到自噬現(xiàn)象，Not