新生鼠實驗性缺氧缺血性腦損傷后μ-Calpain的活性變化及其抑制劑的腦保護作用研究.pdf

1、目的 觀察新生鼠實驗性缺氧缺血性腦損傷(HIBD)后腦組織中μ-calpain mRNA及蛋白質(zhì)水平的表達，研究caspase-3活性亞單位及凋亡細胞的變化規(guī)律，并觀察予calpain抑制劑-3(MDL28170)干預后對上述指標的影響，探討其對HIBD后腦的作用及作用機制。 方法 建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型，觀察腦組織病理學及超微結(jié)構(gòu)變化，計數(shù)海馬CAl區(qū)神經(jīng)元死亡數(shù)；采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應動態(tài)檢測損傷側(cè)

2、腦組織中μ-calpain mRNA的變化，免疫印跡技術(shù)檢測μ-calpain活化蛋白質(zhì)的表達；免疫印跡及免疫組織化學技術(shù)檢測caspase-3活性亞單位的變化，脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的原位缺口末端標記法檢測凋亡細胞的變化；并予calpain抑制劑-3干預，檢測上述指標的變化。 結(jié)果 1．HIBD后大鼠出現(xiàn)不同程度行為能力障礙，大體觀察見腦組織充血水腫、梗死灶形成，HE染色見神經(jīng)元腫脹、變性、丟失，排列紊亂，膠質(zhì)細胞

3、增生；電鏡下可見神經(jīng)元細胞器腫脹，核糖體減少，核染色質(zhì)分布不均、固縮，核崩解；HI后24h海馬CAl區(qū)神經(jīng)元明顯減少，與對照組相比差異顯著(p<0.01)。 2．與對照組比較，HIBD后6h損傷側(cè)腦組織μ-calpain mRNA開始增高，24h到達高峰(p<0.05)，48-72h下降，但是仍然高于對照組(p<0.05)；μ-calpain蛋白質(zhì)的活性片段在HI后6-12h表達明顯增高(p<0.05)，24h達到高峰(p<0.

4、01)，48-72h仍處于較高水平(p<0.05)。 3．HI后caspase-3蛋白質(zhì)表達隨著時間延長逐漸增強，免疫印跡顯示其活性片段在HIBD后6h開始增加，24h達到高峰(p<0.01)，48h開始下降，72h降至對照組水平；caspase-3阻性細胞數(shù)在HI后48h達到高峰，72h下降，但仍明顯高于對照組(p<0.01)。 4．HIBD大鼠損傷側(cè)大腦皮質(zhì)及海馬CAl區(qū)凋亡細胞隨著時間延長逐漸增多，分別于24h及4

5、8h達到高峰，72h仍處于較高水平，與對照組之間有顯著性差異(p<0.01)。 5．給予calpain抑制劑-3(MDL28170)干預后，干預組大鼠μ-calpain蛋白質(zhì)表達、caspase-3蛋白條帶及陽性細胞數(shù)、凋亡細胞數(shù)均較同時間點HIBD組減少(p<0.05)；MDL28170雖然能減少μ-calpain mRNA的表達量，但與HIBD組相比差異不明顯(p>0.05)。 結(jié)論 1．新生鼠HIBD時μ-

6、calpain mRNA及蛋白質(zhì)水平顯著增高，與對照組差異明顯，提示μ-calpain可能參與了缺氧缺血性腦損傷的發(fā)生。 2．Caspase-3蛋白質(zhì)表達在HI后明顯增高，且與凋亡細胞數(shù)的增加呈同相變化，證實HIBD中存在細胞凋亡，與caspase-3水平增高密切相關(guān)。 3．Calpain抑制劑-3(MDL28170)能顯著降低μ-calpain及caspase-3的表達，減少凋亡細胞數(shù)目，提示其具有腦保護作用，這種作用