肺炎支原體脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞SPLUNC 1表達(dá)的變化.pdf

1、目的:觀察不同濃度肺炎支原體脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白(Mycoplasmapneumoniae lipid-associated membrane proteins,MP-LAMPs)在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞(HBECs)短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(Short Palate Lung and Nasal epithelium Clone1,SPLUNC1)表達(dá)的影響，探討SPLUNC1在呼吸道感染中的作用及其表達(dá)與肺炎支原體感染的時(shí)效關(guān)系

2、和量效關(guān)系。
　　 方法:
　　 ①通過(guò)間接免疫熒光法觀察SPLUNC1蛋白在HBECs細(xì)胞內(nèi)定位;
　　 ②不同濃度MP-LAMPs(0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL)刺激HBECs后，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量FQ-PCR法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(2 h、4h、8h、16 h及24 h)SPLUNC1基因表達(dá);同時(shí)用0.5μg/mLMP-LAMPs誘導(dǎo)HBECs不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)Western-blotting法檢測(cè)SPL

3、UNC1蛋白的表達(dá)。
　　 ③MTT法檢測(cè)不同濃度的MP-LAMPs和LPS對(duì)HBECs細(xì)胞增殖的影響，找出對(duì)HBECs細(xì)胞增殖影響相似的MP-LAMPs與LPS濃度，比較MP-LAMPs與LPS刺激HBECs后，SPLUNC1基因表達(dá)的差異。
　　 結(jié)果:
　　 ①SPLUNC1蛋白主要分布于細(xì)胞胞漿中。
　　 ②在相同時(shí)間點(diǎn)，不同濃度的MP-LAMPs能誘導(dǎo)SPLUNC1表達(dá)上調(diào)，其中0.5μg/mL

4、 MP-LAMPs濃度組SPLUNC1基因表達(dá)量最顯著，不同濃度組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）;在同一濃度組，MP-LAMPs刺激細(xì)胞2h后SPLUNC1基因及蛋白表達(dá)量開(kāi)始上調(diào)，并在4h時(shí)達(dá)高峰，隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降，不同時(shí)間組兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）。
　　 ③與MP-LAMPs刺激細(xì)胞后24 h內(nèi)SPLUNC1基因表達(dá)先增高后降低不同，LPS刺激細(xì)胞后同時(shí)間內(nèi)SPLUNC1基因表達(dá)呈持續(xù)增高趨