Rock信號通路參與TNF-α刺激兔基底動脈平滑肌增殖的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是出血性卒中較為常見的疾病,除了發(fā)病前期的高病死率外, SAH后期較多因素引起的腦血管痙攣(cerebral vasospasm,CVS)的發(fā)生率也很高[1]。CVS引起的缺血性腦損害,成為SAH后期致死和致殘的重要原因。因此預防和治療CVS是臨床上亟待解決的問題。
　　迄今為止,已有比較多的學者對SAH后CVS的發(fā)生發(fā)展進行了研究

2、,力圖闡明其發(fā)生機制從而探索出有效的治療方法,但至今其具體發(fā)生機制仍未能夠完全闡明。但是隨著相關研究的深入,我們對于SAH后CVS發(fā)生發(fā)展機制的認識也逐漸加深。以往大多數(shù)研究是對于SAH后的致痙攣因子展開,并嘗試應用相應致痙因子阻滯劑來防治CVS,但效果不佳。因此SAH后受累相關動脈血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖引發(fā)的管腔狹窄及管壁增厚等病理形態(tài)改變引起了相關學者專家的注意,并

3、且成為了目前研究SAH后CVS發(fā)生的新熱點。在SAH后CVS發(fā)生的腦血管壁增殖過程中,炎性因子與其關系密切。
　　Rock信號通路在生物體內(nèi)發(fā)揮著廣泛的作用。有研究表明Rock信號可能通過誘導血管平滑肌收縮而與CVS密切相關,臨床上也使用一種Rock抑制劑法舒地爾治療CVS。但目前對于SAH后Rock信號是否參與炎性因子引起的VSMCs異常增殖和CVS的發(fā)生鮮有報道。所以進一步闡明Rock信號通路在炎性因子引起的VSMCs增殖中的

4、具體作用,對于明確SAH后CVS發(fā)生的具體機制,從而在臨床上能夠采取相應措施阻斷其發(fā)生發(fā)展具有重要的意義。
　　方法:
　　1.組織塊法培養(yǎng)家兔VSMCs并鑒定;
　　2.將細胞進行分組:陰性對照組,TNF-α處理組,Y-27632干擾組,檢測各組細胞的增殖及細胞周期;
　　3.應用免疫細胞化學及Western-blot檢測各分組VSMCs中PCNA蛋白的表達及分布。
　　結果:
　　1.成功利用組織

5、塊法原代培養(yǎng)出家兔基底動脈VSMCs,同時完成鑒定工作;
　　2.CCK-8法檢測提示TNF-α顯著促進VSMCs的增殖(P<0.01),Y-27632呈濃度依賴性的抑制TNF-α的促增殖作用(P<0.01);
　　3.流式結果顯示:TNF-α刺激VSMCs后與對照組相比,處于G0/G1期細胞比例明顯降低,S期+G2/M期細胞比例明顯增高(P<0.05),Y-27632預處理后此種變化被逆轉;
　　4.免疫細胞化學及W

6、estern-blot檢測結果顯示PCNA蛋白表達于細胞核內(nèi),TNF-α顯著增加PCNA于細胞核內(nèi)的表達(P<0.01),Y-27632具有顯著的逆轉TNF-α促PCNA表達的作用(P<0.05);
　　結論:
　　1.應用組織貼塊法可成功培養(yǎng)出家兔基底動脈VSMCs;
　　2.TNF-α可以通過加速細胞周期的進程來促進VSMCs的增殖,這一促增殖作用中Rock信號通路發(fā)揮了重要的作用;
　　3.Y-27632通