腫瘤細胞葉酸受體表達上調(diào)及其對葉酸偶聯(lián)物攝取的影響.pdf

1、目前，利用葉酸進行靶向治療或靶向成像的研究主要依賴于靶細胞表面表達足夠水平的葉酸受體（FR）。事實上，在成功應(yīng)用FR介導(dǎo)靶向治療的試驗動物模型中，腫瘤組織都表達最佳水平且均一的葉酸受體；對于人體腫瘤葉酸受體表達的結(jié)果顯示，葉酸受體在不同細胞中的表達存在較大差并且表達不均一。有關(guān)調(diào)節(jié)葉酸受體表達的研究顯示：轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑如全反式維甲酸、地塞米松（Dex）等可以選擇性上調(diào)葉酸受體陽性腫瘤細胞中FR的表達，受體調(diào)節(jié)劑無論單獨使用或與組蛋白脫乙?；?/p>

2、酶抑制劑聯(lián)合使用時，均可以在調(diào)節(jié)FR表達方面發(fā)揮效應(yīng)。
　　 本研究選擇地塞米松作為受體調(diào)節(jié)劑上調(diào)腫瘤細胞的FR-α表達；同時考察當(dāng)細胞表面FR-α表達上調(diào)后對細胞葉攝取酸偶聯(lián)載藥膠束的影響。
　　 1.地塞米松上調(diào)腫瘤細胞FR-α表達
　　 通過RT-PCR和Western Blot方法鑒定了三種腫瘤細胞FR-α表達情況，結(jié)果顯示：MCF-7為葉酸受體陰性腫瘤細胞；HeLa和SKOV-3為葉酸受體陽性腫瘤細胞。

3、選擇HeLa和SKOV-3作為考察受體調(diào)節(jié)和靶向攝取的實驗細胞，經(jīng)WST-1方法檢測，結(jié)果顯示：Dex使用劑量在5-100 nM范圍內(nèi)對實驗細胞增殖幾乎無影響。利用定量PCR和流式細胞儀分別檢測Dex對FOLRI基因表達的及細胞表面FR-α表達的上調(diào)作用。實驗結(jié)果顯示：Dex劑量在5-100 nM范圍對SKOV-3細胞中FOLRI基因表達上調(diào)近2倍，但對細胞表面蛋白FR-α的表達無明顯調(diào)節(jié)作用；相同劑量范圍Dex對HeLa細胞中FOLR

4、I基因表達上調(diào)超過2倍，同時細胞表面FR-α表達升高超過1倍。
　　 2.FR-α上調(diào)后腫瘤細胞對葉酸靶向的影響
　　 用熒光顯微鏡和流式細胞儀考察Heta細胞攝取葉酸偶聯(lián)膠束（FM）和普通膠束（M）的差異。結(jié)果顯示：HeLa細胞對FM攝取量高于M；且細胞對FM的攝取可以被1 mM游離葉酸抑制。表明FR參與了HeLa細胞對FM的攝取過程。同時比較調(diào)節(jié)FR-α表達前后對細胞攝取FM的影響：使用100 nM地塞米松預(yù)處理He