BMP4 shRNA重組腺病毒的構建及其對GH3細胞增殖及PRL分泌的影響.pdf

1、目的:研究干擾BMP-4基因表達后對大鼠垂體瘤GH3細胞增殖和泌乳素分泌能力的影響,觀察腺病毒對GH3細胞感染的敏感性,為基因治療在控制人垂體腺瘤細胞生長及激素分泌的應用上提供實驗基礎和理論依據(jù)。
　　方法:(1)設計并構建表達特異性BMP-4 shRNA的重組腺病毒載體。(2)用構建的靶向BMP4的shRNA并攜帶有EGFP基因的重組腺病毒(rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA)感染GH3細胞,應用RT-PCR

2、和Western Blot方法檢測BMP-4基因的干擾效果。(3) Western Blot檢測rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后EGFR蛋白的變化。(4) MTS檢測rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后對細胞增殖的影響。(5) ELISA檢測rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后對細胞PRL分泌的影響。
　　結果:(

3、1)成功設計并構建攜帶靶向BMP4的shRNA的重組腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA,并成功轉染包裝細胞,得到高滴度的重組腺病毒。(2)重組腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA感染GH3細胞后,BMP4-mRNA和蛋白都受到明顯抑制。(3) BMP4被干擾后,EGFR蛋白的表達也下調了。(4) rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后,MTS檢測提示較