拉米夫定與原兒茶酸藥物組合體外抗HBV作用機制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染是世界性難題，不僅會造成急、慢性肝炎，而且與肝硬化和肝癌的發(fā)生密切相關。全世界約有3.5億HBV慢性感染者，每年死于肝癌的約為32萬。我國現(xiàn)有乙型肝炎患者約為1200萬。
　　 目前用于抗HBV治療的抗病毒藥物中單一藥物治療乙肝根本不能達到患者的理想狀態(tài)，參考治療艾滋病的經驗，人們推測合理的聯(lián)合藥物治療可以提高藥物療效，由于拉米夫定的諸多優(yōu)點，大多數聯(lián)合治療試驗均將其納入

2、，加之中醫(yī)藥在治療中恢復肝功能、防止肝纖維化、調整免疫機能等方面都有一定的優(yōu)勢，拉米夫定聯(lián)合中藥治療慢性乙型肝炎的思路已經成為新的研究方向。通過我們前期的研究結果，已經篩選出具有抗病毒功效的藥物組合--拉米夫定聯(lián)合原兒茶酸。
　　 研究HBV的常用肝癌細胞系包括HepG2、Huh6、Huh7等，這些細胞系都具有絕大部分肝細胞特異的功能，能分泌主要的血漿蛋白。HepG2.2.15細胞是來源于HepG2細胞，整合了ayw型HBV全基

3、因組，能夠部分模擬HBV的生活周期，表達各種HBV產物并能分泌HBVDane顆粒的穩(wěn)定的人類肝癌細胞株，更接近于人體肝細胞內環(huán)境的實際情況，被研究者廣泛應用于HBV復制的研究。
　　 本文研究了拉米夫定與原兒茶酸藥物組合抑制乙肝病毒(HBV)復制的分子生物學和細胞生物學機理。Huh7細胞轉染五種不同的HBV基因啟動子質粒后，分別與藥物作用一定時間，測定各組熒光值，分析藥物對HBV五種基因啟動子的調控作用。Huh7細胞轉染外源性G

4、FP-HBx融合質粒后，分別與藥物作用一定時間，利用共聚焦熒光顯微鏡觀察藥物對外源性HBVX蛋白在細胞內分布的影響。HepG2.2.15細胞與藥物作用一定時間后，用Westernblot分析藥物對內源性HBVX蛋白在細胞核內含量的影響。
　　 結果顯示不同濃度拉米夫定、原兒茶酸及其藥物組合對HBV啟動子(含兩個增強子)有不同程度的抑制作用，且聯(lián)合用藥效果最好。拉米夫定及其與原兒茶酸的藥物組合對HBVX蛋白的入核有抑制作用，且聯(lián)合