鼠疫血清抗體蛋白譜的研究.pdf

1、[背景] 鼠疫作為一種烈性傳染病，至今人們對(duì)其的致病因素、發(fā)病機(jī)制還不能夠完全了解。盡管現(xiàn)在已經(jīng)有很多種鼠疫疫苗，但是這些疫苗對(duì)肺型鼠疫的免疫保護(hù)作用并不是很理想。基于F1和V抗原的基礎(chǔ)上，加入其他的具有免疫保護(hù)作用成分的多亞單位疫苗將是未來鼠疫疫苗研究的一個(gè)方向。對(duì)自然環(huán)境下感染的患者和EV76疫苗攻擊的人群體內(nèi)血清抗體譜進(jìn)行研究將為更好的了解鼠疫的致病機(jī)制，尋找新的亞單位疫苗成分提供線索。蛋白芯片技術(shù)是近年來發(fā)展起來的能夠同時(shí)研究多

2、個(gè)抗原—抗體、蛋白—蛋白相互作用的高通量技術(shù)，它具有大規(guī)模、高通量、敏感性高、所需樣本少等特點(diǎn)。 [方法] 挑選出149個(gè)鼠疫菌已知的或者推測(cè)的與毒力相關(guān)蛋白的基因與表達(dá)載體PET32a連接在大腸桿菌BL21（DE3）中表達(dá)，利用表達(dá)的目的蛋白氨基酸端帶有6×His標(biāo)簽與Ni—NTA具有親和的原理，通過96孔板對(duì)蛋白進(jìn)行高通量純化。純化的蛋白點(diǎn)在醛基化玻片上制備蛋白芯片。通過與鼠疫患者血清、EV76疫苗株免疫人群的血清反應(yīng)，檢測(cè)

3、不同血清中抗體升高的種類和趨勢(shì)。 [結(jié)果] 本實(shí)驗(yàn)中共有116個(gè)蛋白表現(xiàn)為有意義。通過分析鼠疫患者和EV76疫苗株免疫人群的血清抗體譜，共有57個(gè)蛋白在所有的血清中檢測(cè)到相應(yīng)的抗體。鼠疫患者中一部分來自于云南省家鼠疫源地的腺型鼠疫，一部分來自于野鼠疫源地的肺型鼠疫。其中只在腺型鼠疫患者體內(nèi)YPCD1.41，YPMT1.50Ac，YPO2100，YPO2117，YPO2135，YPO2315，YPO2321，YPO2944，YPO

4、3015，YPO3616，YPO3754，YPPCP1.08c，12個(gè)蛋白可以產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。而肺型鼠疫所特有的共10個(gè)蛋白可以產(chǎn)生相應(yīng)的抗體即 YPCD1.38c，YCD1.37c，YPO1860，rv10，YPMT1.05c，YMT1.46c，YPMT1.74，YPMT1023，YPO2134，YPO3516.其中在自然感染的人群中共有8個(gè)蛋白始終存在，并且這些蛋白所產(chǎn)生的抗體升高幅度大，所以可以作為下一階段鼠疫疫苗研究的重點(diǎn)，研究