大蒜素對大鼠肝星狀細胞膠原生成的調節(jié)作用.pdf

1、背景:肝病治療一直是困擾醫(yī)學界的難題,近幾年,肝纖維化的研究對于慢性肝病、肝硬化的形成所擁有的重要研究價值,被醫(yī)學界所認可,其發(fā)生的機制也得有了一定的共識。目前公認的肝纖維化機制,是肝細胞的外基質發(fā)生降解減少與過度的沉積所造成的。肝纖維化的研究主要圍繞膠原纖維的合成與分解,以及影響膠原合成與分解的因素,以期找到肝纖維化的早期診斷與治療的辦法。其中細胞因子介導細胞與細胞之間、細胞與基質之間的相互作用所引起的肝星狀細胞激活肝纖維化過程,是該

2、研究的最關鍵部分,如果發(fā)生反復的肝損傷,可進一步活化HSC。根據臨床與實驗資料,脂質過氧化產物能更加容易地激活HSC,從而損傷肝細胞。因此,在治療的過程中使用抗氧化劑,能夠對肝損傷以及肝纖維化癥狀進行減輕。在抗氧化劑中,大蒜素是非常有效的一種,憑著高度的抗氧化能力,在臨床與實驗中得到廣泛的應用。
　　目的:觀察大蒜素對大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影響,探討大蒜素抗肝纖維化的作用及其機制。
　　方法:大鼠肝星狀細

3、胞株HSC-T6生長于體積分數(shù)為10％小牛血清及1×105IU/L的青霉素、100mg/L的鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中,在37℃、5%CO2飽和蒸汽的條件下進行培養(yǎng)。分為HSC-T6細胞空白對照組、溶劑對照組、大蒜素藥物實驗組。大蒜素藥物實驗組加入不同濃度的DATS。以不加藥物而加等體積的10%小牛血清及1×105IU/L的青霉素、100mg/L的鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基為試劑對照組。溶劑對照組加入1.35μl/ml二甲基亞砜。通過MTT法

4、檢測大蒜素對大鼠肝星狀細胞的增殖的影響;通過BrdU摻入實驗檢測大蒜素對大鼠肝星狀細胞的增殖抑制作用;通過Hoechst33342染色及流式細胞術檢測AnnexinV-FITC/PI雙染檢測大蒜素對大鼠肝星狀細胞的凋亡作用;透射電鏡下觀察大蒜素作用后大鼠肝星狀細胞的超微結構的變化;Westernblot實驗鑒定大蒜素作用后大鼠肝星狀細胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的影響。
　　結果:HSC-T6大蒜素DATS各濃度處理組

5、與空白對照組及溶劑對照組比較,增殖抑制率和細胞凋亡率明顯增高,有顯著性差異(P<0.05);并且DATS濃度增高時,HSC-T6的抑制率、凋亡率也逐漸增強;DATS高濃度實驗組(濃度含量24μg/mlDATS)的增殖抑制率和細胞凋亡率明顯高于空白對照組、試劑對照組及低濃度實驗組。大蒜素可抑制大鼠肝星狀細胞的Bcl-2、MAO、TIMP-1蛋白的生成。
　　結論:大蒜素可以抑制HSC-T6增殖,抑制其凋亡相關蛋白及膠原生成相關蛋白,