雷公藤內(nèi)酯醇對肝癌細胞株HepG2的作用和作用機制.pdf

1、研究背景：
　　 雷公藤內(nèi)酯醇（Triptlide，TPL）是從衛(wèi)矛科雷公藤屬植物中提取出來的具有多種生物活性的小分子化合物，是雷公藤提取物中主要的活性成分，主要用于自身免疫性疾病及炎性疾病的治療。最近研究發(fā)現(xiàn) TPL對白血病、卵巢癌、腎癌等多種腫瘤均有很強的抑制作用，具有廣譜的抗腫瘤作用，其抗腫瘤作用主要與 caspase通路誘導細胞凋亡有關。肝癌是常見惡性腫瘤，其發(fā)病率居常見腫瘤第五位，死亡率僅次于胃癌和食管癌，而在我國僅次

2、于肺癌，是惡性腫瘤的第二致死原因。目前有關 TPL對肝癌的作用研究較少，其作用及作用機制不清。
　　 研究目的：
　　 研究 TPL對肝癌細胞株 HepG2增殖抑制和凋亡誘導作用及 HepG2中caspase-3、8、9與 PARP（聚 ADP核糖聚合酶）蛋白的表達變化情況，探討 TPL抗腫瘤作用及作用機制，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 以加培養(yǎng)基細胞為空白對照組，按預計量加入 TP

3、L，使 TPL終濃度為10、20、40、80nmol/L的 HepG2細胞為實驗組。分別收集培養(yǎng)24、48和72小時 HepG2細胞，MTT法檢測 TPL對細胞增殖的影響；收集培養(yǎng)24小時 HepG2細胞，Hoechst熒光染色觀察凋亡細胞形態(tài)變化，AnnexinV/PI流式細胞儀標記法檢測 TPL對HepG2細胞凋亡作用的影響，Western blot檢測 caspase-3、8、9與 PARP的表達情況。
　　 研究結(jié)果：<

4、br>　　 經(jīng) MTT檢測，10、20、40、80nmol/L濃度的 TPL作用24小時 HepG2細胞的抑制率分別為15.2、22.5、34.9、40.7％；48小時抑制率分別為21.5、34.8、44.1、44.8％；72小時抑制率分別為31.6、47.2、51.6、56.0％；抑制作用呈時間和劑量的依賴性。TPL對 HepG2的 IC50為38nmol/L。10、20、40、80nmol/L濃度的 TPL作用24小時的 HepG

5、2細胞，hoechst熒光染色顯微鏡下均出現(xiàn)明顯的凋亡細胞；AnnexinV/PI流式細胞儀檢測其凋亡率分別為8.89％、9.81％、14.69％、22.04％，對照組抑制率為7.35％，其凋亡率呈濃度依賴性；western blot結(jié)果顯示，其 caspase-3、9、PARP蛋白活化顯影，且均較對照組顯影增強，顯影強度隨 TPL濃度的增加而增強，未見 caspase-8活化顯影。
　　 研究結(jié)論：
　　 TPL對 H