何首烏飲對過度訓(xùn)練大鼠睪丸組織3β-HSD的影響.pdf

1、運動性低血睪酮是影響運動能力和運動后恢復(fù)體力的重要因素之一,對體育運動員的體力增強(qiáng)和恢復(fù)很重要。運動性低血睪酮長期以來一直備受關(guān)注,因此運動性低血睪酮成為運動醫(yī)學(xué)界研究的重點領(lǐng)域。而何首烏飲由《宣明論方》何首烏丸加味而成,在何首烏、肉從蓉、懷牛膝基礎(chǔ)上增加淫羊藿補(bǔ)腎助陽以強(qiáng)筋骨,丹參活血化瘀以通心脈,茯苓健脾利濕以寧心神。有文獻(xiàn)報道何首烏飲能夠提高大鼠血清睪酮含量和SOD活性、恢復(fù)下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的平衡、降低生精細(xì)胞凋亡指數(shù)等。3β

2、-HSD分子量為43 kd具有Ⅰ型和Ⅱ型兩種類型其中Ⅱ型主要存在于睪丸,3β-HSD在類固醇激素的合成中將孕烯醇酮轉(zhuǎn)化為孕酮,后者經(jīng)羥化、側(cè)鏈裂解形成睪酮,它是睪酮合成的關(guān)鍵酶之一,是評價睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能的經(jīng)典指標(biāo)。本實驗對大鼠施行高強(qiáng)度力竭游泳訓(xùn)練,并進(jìn)行何首烏飲灌胃預(yù)防、治療、干預(yù),從生化-組織-蛋白-基因水平等不同層次探討何首烏飲對過度訓(xùn)練大鼠睪丸組織3β-HSD表達(dá)的影響。
　　 目的:
　　 研究何首烏飲對過度

3、訓(xùn)練雄性大鼠睪丸睪酮分泌的影響,3β-HSD在睪丸組織免疫組織化學(xué)法染色和mRNA基因表達(dá),以及在睪丸組織中的蛋白表達(dá)。用以探討何首烏飲對過度訓(xùn)練大鼠睪丸組織3β-HSD的影響。
　　 方法:
　　 1疲勞模型建立及分組:
　　 選用8周齡清潔級雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rats,SD)75只,動物(合格證編號1005050)每只體重為180-200g,自由進(jìn)食,飲水,室溫20℃-25℃,相對濕

4、度45％-55％,每天光照12h,隨機(jī)分為5組:安靜對照組(A組)、安靜何首烏飲組(B組)、自然恢復(fù)組(C組)、何首烏飲治療組(D組)和何首烏飲預(yù)防組(E組),每組15只。自然恢復(fù)組和何首烏飲治療組可以看作模型組,C組、D和E組大鼠復(fù)制力竭運動動物模型,其中的E組每天訓(xùn)練前給何首烏飲20g／kg／d(含生藥9.6g／ml)灌胃作為預(yù)防,安靜對照組(A組)灌胃生理鹽水,安靜何首烏飲組灌胃何首烏飲。模型成功后各組停訓(xùn),何首烏飲治療組給何首烏

5、飲20g／kg／d(含生藥9.6g／ml)灌胃治療42d,自然恢復(fù)組灌胃生理鹽水,安靜何首烏飲組繼續(xù)灌注何首烏飲。何首烏飲預(yù)防組停止灌胃,自由飲食。安靜對照組繼續(xù)灌胃生理鹽水。
　　 2方法
　　 (1)判斷疲勞模型是否建立成功:在游泳訓(xùn)練42 d后大鼠用10％水合氯醛麻醉,經(jīng)內(nèi)眥眶后靜脈取血約1.5 mL,離心取上清。當(dāng)大鼠出現(xiàn)運動遲緩,體重下降,食量減少等現(xiàn)象。同時將睪酮降低作為判斷疲勞成功的重要指標(biāo),血紅蛋白和血肌

6、酐作為輔助的判斷指標(biāo),分別采用生化分析儀檢測全血血紅蛋白和血清肌酐含量以及血清睪酮含量,血清睪酮含量明顯低于正常組,以及血紅蛋白低于正常組和血肌酐升高并且明顯高于正常組,通過以上生化指標(biāo)和大鼠的外部特征可以確定造模成功。
　　 (2)采用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠睪丸組織間質(zhì)細(xì)胞3β-HSD表達(dá)情況。
　　 (3)Western Blot法檢測各組大鼠睪丸組織3β-HSD蛋白的表達(dá)。
　　 (4)RT-PCR檢測各組

7、大鼠睪丸組織3β-HSD mRNA的基因表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1免疫組化染色:各組切片均可見3β-HSD染色,免疫陽性細(xì)胞主要是睪丸間質(zhì)細(xì)胞。免疫陽性產(chǎn)物位于細(xì)胞間質(zhì),通常呈棕黃色顆粒狀,小部分呈彌散狀。3β-HSD在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中為深黃色顆粒為陽性表現(xiàn),與安靜組比較何首烏飲組表達(dá)陽性最強(qiáng),有差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)而自然恢復(fù)組表達(dá)最弱,治療組和預(yù)防組強(qiáng)于自然恢復(fù)組,有差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

8、r>　　 2 Western Blot檢測睪丸組織蛋白的表達(dá):安靜何首烏飲組大鼠睪丸3β-HSD蛋白表達(dá)明顯高于安靜對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),何首烏飲治療組3β-HSD蛋白表達(dá)高于自然恢復(fù)組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),何首烏飲預(yù)防組3β-HSD蛋白表達(dá)高于自然恢復(fù)組(P<0.05),治療組和預(yù)防組之間無顯著性差異。
　　 3 RT-PCR檢測睪丸組織3β-HSD mRNA的表達(dá):與安靜組相比,3β-