shRNA抑制HSF-1表達增強17-aag抗結腸癌療效的體外實驗研究.pdf

1、目的：⑴通過野生型SW1116細胞觀察HSP90拮抗劑17-aag對結腸癌細胞體外增殖，周期分布和凋亡的影響。⑵通過空載真核表達載體pGPH1/GFP/Neo-shNC和低表達HSF-1真核表達載體pGPH1/GFP/Neo-HSF-1，篩選HSF-1表達不受影響的結腸癌SW1116/HSF-1(+)細胞（以下簡稱HSF-1（+）細胞）和HSF-1穩(wěn)定低表達的結腸癌SW1116/HSF-1(-)細胞（以下簡稱HSF-1（-）細胞），觀察

2、低表達HSF-1對17-aag在結腸癌SW1116細胞體外增殖、周期分布和凋亡作用中的影響，以及低表達HSF-1對17-aag處理后結腸癌SW1116細胞內(nèi)HSF-1、HSP90、HSP70、HSP27表達情況的影響，分析細胞生物學性狀的改變是否與HSP90、HSP70、HSP27蛋白相關。
　　 方法：①野生型SW1116細胞經(jīng)不同濃度不同時間17-aag處理后，通過CCK-8檢測細胞活性、FCM檢測細胞周期分布和凋亡比例，觀

3、察HSP90拮抗劑17-aag對結腸癌細胞體外增殖，周期分布和凋亡的影響。②pGPH1/GFP/Neo-shNC和pGPH1/GFP/Neo-HSF-1質粒轉染SW1116細胞株，G418篩選穩(wěn)轉細胞株（HSF-1（+）細胞和HSF-1（-）細胞），通過半定量PCR、qPCR及WB驗證穩(wěn)轉效果。③通過CCK-8檢測細胞活性、FCM檢測細胞周期分布和凋亡比例，觀察HSF-1(+)細胞和HSF-1(-)細胞在17-aag處理前的細胞生物學性

4、質。④通過CCK-8檢測細胞活性、FCM檢測細胞周期分布和凋亡比例觀察HSF-1(+)細胞和HSF-1(-)細胞在經(jīng)17-aag處理后細胞生物學性狀的改變以及通過WB檢測HSF-1、HSP90、HSP70、HSP27蛋白表達量的變化。
　　 結果：⑴17-aag對野生型SW1116細胞增殖具有明顯的抑制作用，可以誘導G2/M期周期阻滯和細胞凋亡。⑵轉染pGPH1/GFP/Neo-shNC和pGPH1/GFP/Neo-HSF-1質

5、粒后，通過G418成功篩選出HSF-1穩(wěn)定低表達的HSF-1(-)細胞和HSF-1表達沒有受到影響的HSF-1(+)細胞，并通過半定量PCR、qPCR及WB得到證實。⑶HSF-1(+)細胞和HSF-1(-)細胞在未經(jīng)17-aag處理的情況下細胞增殖、周期分布及凋亡等生物學性質相似，差異沒有統(tǒng)計學意義。⑷在經(jīng)17-aag處理后，HSF-1（-）細胞的增殖速率較HSF-1（+）細胞慢(P<0.001)，凋亡比例增高(P<0.001)；周期分

6、布中，HSF-1（-）細胞G2/M期細胞比例較HSF-1（+）細胞降低。⑸HSF-1（+）細胞經(jīng)17-aag處理后，胞內(nèi)HSF-1、HSP90、HSP70、HSP27表達量顯著升高，而HSF-1（-）細胞HSPs表達量較HSF-1（+）細胞明顯偏低。
　　 結論：①在體外，17-aag可誘導結腸癌SW1116細胞周期阻滯和發(fā)生凋亡，從而有效抑制細胞生長和殺傷腫瘤細胞。②低表達HSF-1蛋白能提高17-aag對結腸癌SW1116細