復合機制介導的α-常春藤皂苷肝腫瘤主動靶向給藥系統(tǒng)研究.pdf

1、本文以肝腫瘤細胞上的ASGPR和CD147分子為靶標，采用N-乳糖酰殼聚糖(GC)和CD147單抗分別實現(xiàn)受體介導與抗體介導，以α-常春藤皂苷為模型藥物，將其制備成“受體+抗體”的雙重復合機制介導的肝腫瘤主動靶向納米給藥系統(tǒng)。
　　采用乳化溶劑擴散法制備了α-Hed-GC-NP，考察并優(yōu)化了納米粒的處方和制備工藝，確定影響納米粒質量的關鍵要素為GC用量:50 mg，磷脂用量:80 mg，有機相體積:4mL。所制得的α-Hed-GC

2、-NP外觀圓整、分布均勻，平均粒徑（88.70±1.22）nm，包封率（78.53±4.39）％,P.I.值0.105±0.011;藥物在載體材料中分散均勻，釋藥行為具有一定的pH敏感性和緩釋特性。
　　建立了CD147單抗的含量和活性測定方法，采用偶聯(lián)法、溶解法、注入法、吸附法及修飾法等5種方法制備了α-Hed-GC-CD147-NP，分別進行粒徑測定、FT-IR表征和納米粒中單抗活性測定。結果表明，CD147均被α-Hed-G

3、C-NP有效包載，采用修飾法制備的α-Hed-GC-CD147-NP，平均粒徑為(139.53±4.17)nm，CD147單抗的修飾量為1.25μg/mgNP，單抗的活性保留率為53.65％。
　　對α-Hed-GC-CD147-NP的細胞毒作用、誘導細胞凋亡、細胞攝取率及攝取過程進行考察，并與其它3種納米粒進行比較。結果表明，α-Hed及其含藥納米粒對SMMC-7721和HepG2兩種細胞均有顯著的抑制作用，α-Hed-GC-C

4、D147-NP對兩種細胞的IC50最低，分別為（23.51±1.22）、(23.30±0.22)μg/mL;納米粒能誘導細胞凋亡，并呈現(xiàn)劑量依賴性，α-Hed-GC-CD147-NP低、中、高劑量(50、100、200μg/mL)誘導HepG2細胞的凋亡率分別為7.10％、11.87％、25.78％，高于其他納米粒;HepG2細胞對α-Hed-GC-CD147-NP的細胞攝取率最高，2h和24h分別達（86.73±11.29）％和（94

5、.61±4.42）％;隨著時間的延長，納米粒大部分被攝入到包漿，并能進入細胞核，α-Hed-GC-CD147-NP與HepG2細胞的親和力更強，具有良好的肝腫瘤細胞靶向性。
　　研究了α-Hed-GC-CD147-NP的急性毒性，對荷HepG2移植瘤裸鼠的抗腫瘤活性及體內靶向性。結果表明，各納米粒小鼠尾靜脈注射LD50均在12mg.kg-1以上，高于原料藥;各劑量組對荷HepG2細胞裸鼠腫瘤的抑制率IRw均在70％以上，遠高于原料

6、藥中劑量組;具有雙重復合介導機制的α-Hed-GC-CD147-NP抑瘤率最高，低、中、高3個劑量組的抑瘤率分別為84.96％、88.25％、92.46％，顯示了更好的肝腫瘤靶向性。荷瘤裸鼠近紅外熒光成像實驗結果表明，經(jīng)受體或抗體介導的納米粒，腫瘤和肝臟靶向性更強。
　　建立了UPLC-MS法測定體內血漿及組織樣品中α-Hed的分析方法，考察α-Hed-GC-CD147-NP在大鼠體內的藥物動力學特征，及在荷瘤裸鼠體內組織分布情況

7、。結果表明，藥物在大鼠體內呈雙室模型，α-Hed-GC-NP、α-Hed-CS-CD147-NP及α-Hed-GC-CD147-NP的t1/2(α)分別為0.12、0.10、0.05h，t1/2(β)分別為0.97、2.30、1.93h，與原料藥相比，各納米粒體內分布加快，消除減慢。以α-Hed的AUC為參照，上述3種納米粒的生物利用度顯著提高，分別為120％、300％及280％?？贵w或受體介導的納米粒，在肝臟和腫瘤組織內的藥物量遠遠高