非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)對膀胱癌原代細胞增殖的影響.pdf

1、目的：探討非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)對膀胱癌原代細胞增殖的影響,非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)與CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的區(qū)別。
　　方法：對膀胱癌原代細胞采取非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)在37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱和37℃(5％,CO2)培養(yǎng)箱條件下,及CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)在37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱和37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下進行培養(yǎng),檢測分析兩種體系培養(yǎng)基連續(xù)7天pH的比較;采用細胞增殖曲線及克隆形成實驗檢測細胞生長差異情

2、況;采用流式細胞術檢測分析兩種系統(tǒng)對細胞周期及凋亡率影響的比較;并使用RT-PCR、Westernblot技術檢測分析兩種系統(tǒng)下的膀胱癌細胞中survivin、caspase-3基因及蛋白的表達情況。
　　結果：1、非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基與CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基連續(xù)7天pH值穩(wěn)定在7.4左右(P>0.05);而CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大

3、氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基pH值在8.8左右,其明顯高于CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng)基pH值(P<0.05)。
　　2、細胞在非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱(324±11)與CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱(320±15)條件下培養(yǎng),細胞克隆數基本相同(P>0.05);而在CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下細胞克隆數(66±6)比

4、CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下明顯減少(P<0.05)。
　　3、細胞在非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱與CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),細胞生長增殖趨勢基本一致(P>0.05),;而在CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下,比CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下生長增殖顯著下降(P<0.05)。
　

5、　4、細胞在非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱與CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),隨著作用時間的延長細胞凋亡數增加,凋亡率相比無明顯變化(P>0.05);而在CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下比CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下細胞凋亡數明顯增加(P<0.05)。
　　5、細胞在非CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱與C

6、O2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下培養(yǎng),表達survivin、caspase-3因子與蛋白無明顯變化(P>0.05);而在CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(大氣環(huán)境)培養(yǎng)箱條件下隨著培養(yǎng)時間的延長,caspase-3因子與蛋白表達增高,survivinmRNA及其蛋白的表達并未明顯變化,比CO2依賴型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)、37℃(5%,CO2)培養(yǎng)箱條件下表達上調(P<0.05)。
　　結論：膀胱癌非CO2依賴型細