康復(fù)訓(xùn)練對腦缺血大鼠行為學及BDNF、CB表達的影響.pdf

1、背景:
　　 缺血性腦卒中具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高等特點,好發(fā)于65歲以上的人群,是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病。在過去的50年里,腦卒中的死亡人數(shù)以每年數(shù)十萬人數(shù)持續(xù)下降[1],但是腦卒中造成嚴重的肢體功能缺陷嚴重制約著腦卒中患者的日常生活。目前,腦血管病的康復(fù)治療效果及其在腦血管病綜合治療中的重要意義已被國際公認?？祻?fù)治療是急性腦卒中治療體系中的重要組成部分,并且貫穿于治療的全過程。多年來大量實驗和臨床研究證實,中樞神經(jīng)

2、系統(tǒng)具有可塑性即功能重組的能力,康復(fù)訓(xùn)練就是在大腦可塑性理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的?？祻?fù)訓(xùn)練能夠通過增加對大腦皮質(zhì)的信息輸入,促進突觸的可塑性變化,進而形成新的神經(jīng)突觸并且發(fā)揮作用。大量的研究表明康復(fù)訓(xùn)練促進了缺血性腦損傷患者的神經(jīng)功能恢復(fù),提高了患者的社會回歸率,減輕了家庭和社會的負擔,因此康復(fù)訓(xùn)練越來越受到腦血管病患者和醫(yī)務(wù)工作者的重視;但是康復(fù)訓(xùn)練促進腦缺血患者神經(jīng)功能恢復(fù)的機制尚未完全清楚。研究證實,缺血性腦損傷時能夠刺激梗死區(qū)周圍

3、的某些保護性蛋白的表達增加從而發(fā)揮神經(jīng)保護作用,其中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和鈣結(jié)合蛋白-D28k(Calciumbinding protein D-28k,CB)均屬于這類保護性蛋白中的成員。BDNF是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中一員,具有調(diào)控神經(jīng)元生長、分化、增殖以及調(diào)控突觸的可塑性的作用,并能防止神經(jīng)元損傷死亡、改善神經(jīng)元的病理狀態(tài)、促進受損神經(jīng)元再生及分化等生理功能

4、;CB是鈣結(jié)合蛋白家族中最重要成員之一,能夠通過緩沖細胞內(nèi)升高的鈣離子濃度,抑制胞內(nèi)鈣超載造成的細胞毒性損害,發(fā)揮神經(jīng)保護作用。本研究通過建立大腦中動脈阻塞腦缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,運用神經(jīng)行為學評分以及免疫組織化學與蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測方法(Western Blot),觀察康復(fù)訓(xùn)練對腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及梗死區(qū)周圍BDNF、CB的表達影響,探討康復(fù)訓(xùn)練在大鼠缺血性腦損傷中

5、發(fā)揮神經(jīng)保護作用的機制。
　　 目的:
　　 探討康復(fù)訓(xùn)練對腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及梗死區(qū)周圍BDNF及CB的表達影響,研究康復(fù)訓(xùn)練促進腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的機制。
　　 方法:
　　 108只SPF級成年雄性SD大鼠,隨機分為假手術(shù)組(sham-exercise,SE)、模型組(ischaemia-non-exercised control,IC)、康復(fù)組(ischaemia-exercise,IE)

6、。IC組與IE組大鼠采用線栓法制備左側(cè)大腦中動脈腦缺血模型(MCAO),SE組僅分離、暴露頸總動脈、頸外動脈,不結(jié)扎,不插線栓。IE組大鼠在腦缺血24小時后進行康復(fù)訓(xùn)練,SE組、IC組不行康復(fù)干預(yù)。分別于腦缺血第3天、7天、14天對三組大鼠進行神經(jīng)行為學評分;并通過免疫組織化學方法和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測梗死區(qū)周圍BDNF及CB的表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.SE組神經(jīng)行為學評分為0,腦缺血第3天IE組與IC組神經(jīng)行為

7、學評分比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),腦缺血第7天、14天相應(yīng)時間點IE組大鼠神經(jīng)行為學評分明顯低于IC組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 2.免疫組織化學與蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測到BDNF、CB的表達:
　　 (1)IE組與IC及SE組相比,腦缺血第3天梗死區(qū)周圍的BDNF、CB的表達水平差異不明顯無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);但腦缺血第7天、14天,IE組與IC組及SE組相比,BDNF、CB表達水平均增

8、高明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。腦缺血第3天,IC組與SE組相比,梗死區(qū)周圍BDNF、CB表達差異不明顯無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);但腦缺血第7天、14天,IC組與SE組相比,BDNF、CB表達水平均增高明顯,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 (2)SE組梗死區(qū)周圍BDNF與CB在3個時間點表達甚微,趨勢平穩(wěn);IC組梗死區(qū)周圍BDNF、CB的表達高峰均位于腦缺血第7天;IE組BDNF的表達高峰也位于腦缺血第7