胎盤OATP1B3對兩種膽汁酸轉運特征的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[背景]：膽汁酸由膽固醇轉化而來，具有調節(jié)膽固醇代謝、促進脂類的消化和吸收、防止膽石形成等重要作用，同時也具有一定的細胞毒性。胎兒肝臟在妊娠中期就能夠合成膽汁酸，但缺乏代謝能力。胎盤在母胎間膽汁酸轉運中發(fā)揮了重要作用。有機陰離子轉運體OATPs在人類目前共有11個亞家族被確認。多項研究表明胎盤中OATPs參與了母胎間膽汁酸的轉運，而其中OATP1B3可能在胎盤滋養(yǎng)層細胞的轉運功能上發(fā)揮主要作用。
　　 [目的]：研究胎盤OATP

2、1B3對兩種膽汁酸的轉運作用，為ICP對胎兒危害機制探討、降低胎兒風險及新靶向藥物的研發(fā)提供潛在策略。
　　 [方法]：用慢病毒載體介導的RNAi技術沉默OATP1B3的表達，用Real-timePCR和Westernblot檢測干擾效率；用MTT法檢測兩種膽汁酸對細胞的毒性作用；將正常的和干擾后的Swan細胞分別構建體外單層滋養(yǎng)細胞屏障模型，運用高效液相色譜技術檢測兩種膽汁酸轉運情況。
　　 [結果]：(1)MTT法：

3、GCA、GCDCA以10μmol/L、20μmol/L濃度作用24h對細胞無明顯毒性作用(P>0.05)；(2)慢病毒載體介導的RNAi：a.Real-timePCR檢測干擾后mRNA表達下降了94.42％(P<0.05)；b.Westernblot檢測干擾后蛋白表達下降了49.51％(P<0.05)；(3)成功構建體外單層滋養(yǎng)細胞屏障模型：平臺期TEER值為31.90±1.47Ω；(4)膽汁酸底物轉運檢測：正常組、陰性對照組、實驗組轉

4、運曲線形態(tài)基本一致，均與空白組不同，實驗組對GCA、GCDCA轉運量明顯低于正常組和陰性對照組。在頂端側加入起始濃度的GCA/GCDCA，隨著時間變化，GCA/GCDCA逐漸從頂端側被轉運至底端側，當?shù)锥藗鹊腉CA/GCDCA濃度高于頂端側時呈現(xiàn)相反方向的轉運。
　　 [結論]：(1).GCA、GCDCA在20μmol/L以下濃度24h內對Swan細胞沒有明顯的毒性作用。(2).OATP1B3shRNA慢病毒介導的RNAi能特異

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