γ-射線輻照濃縮血小板研究初探.pdf

1、研究背景和目的：經(jīng)血液制品傳播的病毒主要有HBV、HCV、HIV-1/2，此外還有HTLV-1/2、HDV、HEV、巨細胞病毒和微小病毒B19等。目前，我國雖對獻血者進行ALT、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒篩查，有效地控制了輸血傳播疾病的傳播。但由于檢測水平的限制，檢測技術(shù)固有的窗口期問題，以及新病毒及變異株的不斷出現(xiàn)，依然存在發(fā)生輸血傳播疾病的危險。所以，對血液制品潛在的病毒進行有效地滅活，就是保證血液安全的重要措施。大量

2、的實驗證實γ-射線輻照對各種微生物均有殺滅作用，包括有包膜和無包膜的病毒及所有的基因型物質(zhì)。目前，應(yīng)用γ-射線對血液進行輻照主要預(yù)防輸血相關(guān)移植物抗宿主?。═A-GVHD）。γ-射線輻照預(yù)防移植物抗宿主病的原理是利用放射性同位素衰變中產(chǎn)生γ-射線穿透有核細胞，直接使細胞核的DNA產(chǎn)生不可逆的損傷并干預(yù)其正常的修復(fù)過程，造成淋巴細胞喪失有絲分裂的活性和停止增殖。輻照的效果與輻照的劑量直接相關(guān)。 根據(jù)γ-射線輻照預(yù)防移植物抗宿主病及

3、γ-射線可以病毒滅活的理論，我們開展γ-射線輻照血小板病毒滅活的研究。在預(yù)防移植物抗宿主病劑量的基礎(chǔ)上加大輻照劑量至足以使滅活病毒，同時保證血小板的保存質(zhì)量、功能沒有顯著性影響，這是本課題研究的主要內(nèi)容。 方法：本實驗主要為γ-射線輻照血小板病毒滅活研究的前期工作，主要實驗內(nèi)容有： 一、血小板上清中乳酸測定方法的建立。原理：乳酸在乳酸脫氫酶作用下脫氫生成丙酮酸，同時NAD+接受H+生成NADH，根據(jù)NADH在340nm處

4、的吸光度變化來計算血小板上清中乳酸的含量。 二、評價血小板保存期間質(zhì)量指標的選取和血小板保存損傷的研究。主要選取了代謝指標，有pH值、上清中葡萄糖、乳酸、三磷酸腺苷、乳酸脫氫酶、乳酸脫氫酶溢出率。對八份血小板分別在保存的第一天、第三天、和第五天對其代謝指標進行觀察和評價。 三、γ-射線輻照對濃縮血小板保存期間質(zhì)量的影響：取三份血小板每份等分為十份后，一份作對照，其余分別接受35GY、70GY、105GY、140GY、17

5、5GY、210GY、245GY、280GY、315GY的劑量輻照，在輻照后即刻、24小時、保存期末分別檢測每袋血小板LDH溢出率，繪制劑量-LDH溢出率關(guān)系曲線，觀察其變化趨勢。取一袋分若干份冰凍保存，觀察冰凍時間-LDH溢出率關(guān)系曲線，與輻照組對比。取八袋血小板，每袋均分于為五份，分別為對照組、175GY劑量組、210GY劑量組、245GY劑量組、280GY劑量組。分別在輻照后即刻、保存期末檢測LDH溢出率，運用統(tǒng)計學(xué)方法分析。取八袋

6、血小板每袋均分為兩份，分別為對照組、245GY劑量組檢測各種指標，分析輻照組與對照組的區(qū)別。 結(jié)果： 一、建立了多點定標檢測血小板上清中乳酸的方法，為測定血小板上清中的乳酸奠定了基礎(chǔ)。 二、血小板保存過程中，葡萄糖逐漸被消耗，乳酸逐漸產(chǎn)生，pH逐漸下降，ATP被利用，LDH溢出率也逐漸增大。 三、輻照后即刻、24小時各劑量組的LDH溢出率沒有變化趨勢，保存期末隨劑量的增大LDH溢出率也增大，175GY劑量