紫外線抑制樹突狀細胞分化的機制.pdf

1、第一部分，ERK1/2MAPK和p38MAPK通路在iC3b結合的單核細胞向樹突狀細胞分化過程中的作用
　　目的:研究補體iC3b對人血前體單核細胞(Mo)分化的影響,進一步驗證UVB誘導的補體iC3b沉積和CD1a+樹突狀細胞(DC)消失之間的關系;探討ERK1/2(ERK44/42)MAPK和p38MAPK信號傳導途徑是否參與此影響,相應的MAPK抑制劑是否能逆轉這種影響;經iC3b及ERK1/2特異性抑制劑或p38特異性抑制

2、劑預處理后的Mo對CD4+T細胞的作用是否與正常情況下分化的Mo不同。
　　方法:1)從健康人外周血通過免疫磁珠法分離前體Mo。EAiC3b(IgM-plusiC3b-coatedsheeperythrocyte,IgM以及iC3b包被的羊紅細胞)與人血前體Mo以及IL-4、GM-CSF共同培養(yǎng)2天,并與EA(IgMcoatedsheeperythrocyte,IgM包被的羊紅細胞)作對照,用流式細胞儀檢測EAiC3b對前體Mo分

3、化的影響(CD14+,CD1a+);Westernblot檢測磷酸化ERK1/2、p38MAPK的蛋白水平,ELISA法檢測IL-10、IL-12p70水平。2)上述培養(yǎng)過程中加入ERK1/2MAPK抑制劑(PD98059)、p38MAPK抑制劑(SB203580)預處理后,磷酸化ERK1/2、p38MAPK和IL-10、IL-12p70水平的水平,以及DC數量的變化。3)CD4+T細胞增殖實驗:Mo經PD98059(或SB203580

4、)和EAiC3b預處理后,與IL-4、GM-CSF共培養(yǎng)6天經60Co照射后作為刺激細胞,同時分離同種異體人外周血CD4+T作為反應細胞,共培養(yǎng)5天后,經3H-摻入法檢測CD4+T細胞增殖反應。
　　結果:1)相比EA組結果,EAiC3b的加入使Mo向CD1a+DC方向的分化受到抑制,表現(xiàn)為CD1a+的表達明顯降低,磷酸化-ERK1/2MAPK的表達增加,磷酸化-p38MAPK的表達降低,IL-12p70的水平降低,IL-10的水

5、平增加,CD4+T細胞增殖減弱。2)前過程中加入PD98059預處理后,相比EAiC3b結果,則促進了Mo向CD1a+DC方向的分化成熟,表現(xiàn)為CD1a+的表達明顯增加,磷酸化-ERK1/2MAPK的表達降低,IL-12p70的水平增高,IL-10的水平降低,CD4+T細胞增殖明顯提高。3)細胞經SB203580預處理后,相比EAiC3b結果,Mo向CD1a+DC方向的分化成熟被進一步抑制,表現(xiàn)為CD1a+的表達降低,磷酸化-p38MA

6、PK的表達降低,IL-12p70的水平稍有降低,IL-10的水平略有增高,CD4+T細胞增殖有所下調。
　　結論:1)紫外線引起的補體iC3b的沉積是引起CD1a+DC消失的重要原因;2)ERK1/2MAPK抑制劑PD98059可顯著逆轉這種現(xiàn)象,促進前體Mo向CD1a+DC的分化,而p38MAPK抑制劑SB203580則進一步抑制CD1a+DC的分化成熟;3)經iC3b作用的Mo對CD4+T細胞的增殖能力明顯減弱,PD預處理后可

7、顯著恢復,SB預處理后加強這種抑制。
　　第二部分:ERK1/2MAPK抑制劑PD98059可明顯逆轉UVB誘導的小鼠皮膚局部免疫抑制,未觀察到SB203580對遲發(fā)性高敏反應的抗炎作用
　　目的:在UVB誘導局部免疫抑制動物模型的基礎上,觀察外涂PD9059能否逆轉該現(xiàn)象,以證實ERK1/2MAPK在免疫抑制中的關鍵作用,為開發(fā)防光劑提供新的思路;在接觸性高敏反應動物模型的基礎上,觀察外涂SB203580觀察能否抑制炎癥反

8、應,為抗炎劑作基礎。
　　方法:建立UVB誘導局部免疫抑制的小鼠模型,即UVB8kJ/m2照射Balb/c小鼠腹部去毛皮膚后3天,在相同區(qū)域外涂25μ10.5％DNFB致敏,5天后測量基礎右耳廓厚度并在相同耳背處外涂10μ10.2％DNFB激發(fā),24小時后測量耳廓厚度并取右耳組織做HE病理。PD研究:UVB曝光前1小時(A組),曝光同時(A組),曝光后6小時(C組)外涂PD98059,余步驟同前,檢測耳腫反應及HE染色。SB研究:

9、小鼠腹部去毛皮膚外涂不同濃度的SB203580,6小時后相同皮膚處外涂25μ10.5％DNFB致敏,5天后測量基礎右耳廓厚度并在耳背皮膚外涂10μ10.2％DNFB激發(fā),24小時后再次測量耳廓厚度并取耳組織做HE病理染色。各組均設對照。
　　結果:PD研究:UVB8kJ/m2及其以上劑量可引起局部免疫抑制,在此基礎上,光照后6小時外涂PD98059組(C組)可部分逆轉UVB誘導的局部免疫抑制,表現(xiàn)為和對照組相比,耳腫反應有顯著性差

10、異(P＜0.05),而照光前1小時(A組)和照光同時(B組)外涂PD98059組耳腫反應無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);HE染色示真皮水腫增厚伴淋巴細胞的浸潤。SB研究:和對照組相比,致敏前外涂不同濃度的SB203580對接觸性高敏反應無明顯改變(包括耳腫反應和病理HE染色)。
　　結論:ERK1/2MAPK通路在UVB誘導的皮膚免疫中起著關鍵作用,其抑制劑PD98059可顯著逆轉UVB誘導的免疫抑制,PD98059或類似物對UVB