降壓中藥鬼針草中總黃酮的分離純化及質量標準的建立.pdf

1、本文對治療高血壓有效的鬼針草總黃酮的提取工藝、初步除雜工藝及精制工藝進行了研究。得到一條合理的工藝流程，為鬼針草總黃酮的工業(yè)化生產奠定了基礎；對鬼針草藥材與總黃酮部位進行了定性、定量研究，并初步建立了鬼針草藥材與總黃酮部位的質量標準。 本實驗以提取液中總黃酮的量為指標，用單因素實驗確定正交實驗的因素和水平，然后用正交設計法對影響提取效果的因素如乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)和提取時間進行考察，優(yōu)化提取工藝。得出總黃酮的最佳提取工藝

2、為12倍量80％乙醇，連續(xù)提取3次，每次1.0 h。 本實驗對鬼針草總黃酮的初步除雜工藝進行了研究。對ZTC Ⅱ型天然吸附澄清劑的添加順序、添加量、反應時間、反應溫度和待澄清供試液濃度等單因素對澄清效果的影響進行考察。得到澄清劑的作用條件為澄清劑添加量B組分為120 mg/100 ml；A組分為60 mg/100 ml、反應時間為30 min、反應溫度為40℃和待澄清供試液濃度為0.557 mg/ml。 對鬼針草總黃酮的

3、精制工藝進行了研究。以鬼針草總黃酮的吸附率和解吸率為指標，選擇合適的大孔吸附樹脂；以富集后總黃酮的純度為指標，用正交設計法確定最佳純化工藝條件。實驗證明D-101型大孔吸附樹脂對鬼針草總黃酮具有較好的吸附和解吸效果，其最佳工藝條件為：用濃度為4.378 mg/ml并且pH=6的藥液在徑高比為1:20的D-101型大孔吸附樹脂制成的柱子上以2 BV/h的速度進行吸附，使大孔吸附樹脂的比吸附量達11.8mg/g。然后分別用4 BV的水和20

4、％的乙醇洗脫液洗脫，再用5 BV的70％的乙醇溶液以同樣的速度進行解吸。這樣總黃酮的動態(tài)洗脫率達86.7％，干膏中總黃酮的純度由4.0％提高到22.4％，提高了5.5倍。 對鬼針草總黃酮進行了進一步的精制。比較3種聚酰胺對鬼針草總黃酮的吸附率與解吸率，并從上樣藥液pH值、上樣濃度、最大吸附容量、洗脫溶劑的選擇等方面進行了考察。實驗結果表明：60～80目聚酰胺對鬼針草總黃酮的吸附與解吸附較好，確定其最佳工藝條件為：濃度為2.0 m

5、g/ml并且pH=6的藥液在60-80目的聚酰胺柱子進行吸附，使聚酰胺的比吸附量達11 mg／g。先用純化水洗脫除去極性較大雜質成分，洗至Molish反應(檢測還原性糖)為陰性后，然后用6 BV的20％的乙醇洗脫液洗脫；再用4 BV的30％的乙醇洗脫液洗脫；最后分別用2 BV的50％和70％的乙醇洗脫液。收集30％，50％和70％的乙醇洗脫液并分別濃縮制成干膏，測定富集后的總黃酮純度。實驗表明用聚酰胺進行進一步精制的方法優(yōu)于溶劑萃取法(

6、乙醚、氯仿、乙酸乙酯)，有較高的轉移率和較好的富集效果。 本文建立鬼針草及其總黃酮部位的質量標準，在定性研究方面，采用理化鑒別和微乳薄層對鬼針草藥材和總黃酮部位進行鑒別研究。理化鑒別表明鬼針草的提取液中含有黃酮類成分，微乳薄層法可檢出鬼針草藥材和總黃酮部位中的蘆丁和金絲桃苷。定量研究方面，應用UV分光光度法建立鬼針草藥材與總黃酮部位中總黃酮含量的測定方法：應用HPLC法建立鬼針草總黃酮部位中蘆丁含量的測定方法，以上含量測定方法經(jīng)