神經(jīng)母細胞瘤細胞系原位荷瘤及轉(zhuǎn)移瘤荷瘤鼠模型的建立及基因芯片差異表達的實驗研究.pdf

1、第一部分神經(jīng)母細胞瘤細胞系原位荷瘤及轉(zhuǎn)移瘤荷瘤鼠模型建立的實驗研究。 目的：用新鮮腫瘤組織，建立神經(jīng)母細胞瘤體外細胞系，通過建立神經(jīng)母細胞瘤荷瘤鼠原位荷瘤與轉(zhuǎn)移瘤模型，比較二者差異，從而證明腫瘤異質(zhì)性理論并進一步探討神經(jīng)母細胞瘤轉(zhuǎn)移機制。 方法：分2批建立神經(jīng)母細胞瘤荷瘤鼠模型，先利用從術(shù)中新鮮腫瘤標本建立人體外神經(jīng)母細胞瘤細胞系，制備單細胞懸液，通過Typlan細胞計數(shù)法，調(diào)整細胞濃度為2.5×10<'7>/ml。接種

2、于裸鼠(N=11)和SCID小鼠(N=3)皮下，建立荷瘤鼠原位荷瘤與轉(zhuǎn)移瘤模型，再利用荷瘤鼠模型建立的鼠原位瘤體外細胞系及我們自建的人體外細胞系，再次接種于裸鼠(N=20)皮下(人細胞系N=8：鼠細胞系N=6)及腹腔(人細胞系N=6)，觀察并比較致瘤情況。接種濃度均為2.5×10<'7>/ml的單細胞懸液0.5ml。 結(jié)果：裸鼠2批共接種34只，第一批接種14只，致瘤7只，其中單側(cè)皮下致瘤3只，雙側(cè)腹膜后致瘤1只，全身轉(zhuǎn)移有明顯

3、惡液質(zhì)體征的裸鼠1只(有明顯的肝臟轉(zhuǎn)移和惡液質(zhì)體征)，SCID鼠2只致瘤，其中1只單側(cè)皮下致瘤，1只腹膜后雙側(cè)致瘤。即裸鼠(5/11)和SCID小鼠(N=2/3)荷瘤成功。以上均經(jīng)過體格檢查及CT和核磁共振病理檢查證實。裸鼠致瘤率為45.5％，SCID鼠致瘤率為66.7％。致瘤時間最短4周，最長18周，平均9.5周；第二批接種20只，全部致瘤，其中鼠原位瘤體外細胞系皮下接種組6只僅接種局部致瘤，人體外細胞系皮下注射組則5只發(fā)生注射原位局

4、部致瘤，3只發(fā)生肝臟或腹腔轉(zhuǎn)移，腹腔接種6只均出現(xiàn)腹部臟器轉(zhuǎn)移。所有轉(zhuǎn)移瘤模型均有肝臟轉(zhuǎn)移，均經(jīng)病理證實。致瘤率為100％。致瘤時間最短4周，最長10周，平均7周。 結(jié)論：我們兩次均成功建立神經(jīng)母細胞瘤荷瘤鼠皮下原位荷瘤及轉(zhuǎn)移瘤模型，同時轉(zhuǎn)移瘤模型均有肝臟受累，證實我們自己建立的神經(jīng)母細胞瘤細胞系具有局部致瘤及轉(zhuǎn)移特性，并且轉(zhuǎn)移具有器官特異性的特點，說明細胞系中存在具有轉(zhuǎn)移潛性的細胞亞群,而此類細胞亞群正是腫瘤轉(zhuǎn)移的細胞生物學基

5、礎(chǔ)，從而證明腫瘤異質(zhì)性理論，為進一步探討神經(jīng)母細胞瘤轉(zhuǎn)移機制奠定基礎(chǔ)，并為下一步通過基因芯片尋找神經(jīng)母細胞瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因創(chuàng)造了良好的開端。 第二部分神經(jīng)母細胞瘤細胞系荷瘤鼠模型原位瘤及轉(zhuǎn)移瘤基因芯片差異表達的實驗研究。 目的：比較神經(jīng)母細胞瘤荷瘤鼠模型原位瘤和轉(zhuǎn)移瘤基因表達譜，尋找與神經(jīng)母細胞瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因改變，深入探討神經(jīng)母細胞瘤的轉(zhuǎn)移機制。 方法：采用superArray系列Oligo Tumor Metas

6、tasis Microarray基因芯片4張分3組對同一細胞系建立的荷瘤鼠模型原位瘤及轉(zhuǎn)移瘤組織進行芯片雜交，檢測發(fā)光信號，通過對圖像和數(shù)據(jù)分析比較原位瘤與轉(zhuǎn)移瘤的共同差異表達基因。 結(jié)果：在113個候選轉(zhuǎn)移相關(guān)基因中，篩選出25個顯著差異表達基因。功能涉及介導細胞黏附、凋亡及基質(zhì)金屬蛋白酶、細胞因子、細胞轉(zhuǎn)錄、細胞周期調(diào)節(jié)、細胞生長與增殖、凋亡誘導等方面。 結(jié)論：同一細胞系建立的荷瘤鼠模型轉(zhuǎn)移瘤與原位瘤基因表達譜存在差