單細胞聚合酶鏈式反應在胚胎植入前診斷研究中的應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、就單細胞PCR植入前診斷而言,由于檢材有限,因此在擴增效率與準確性方面有很高的要求.目前,運用這一技術(shù)主要面臨兩個問題:污染和無擴增. 為了進行植入前診斷的應用,該文圍繞上述兩個方面,從以下兩部分進行了研究和探索. 第一部分:無污染、高效單細胞PCR體系的建立在建立無污染PCR工作體系的基礎上,吸取人單個淋巴細胞或人胚胎單卵裂球,采用堿裂解、蛋白酶K裂解和改良的蛋白酶K裂解三種不同細胞裂解方法進行細胞裂解,隨后以Hotstar酶結(jié)合巢式

2、PCR擴增人腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(Adrenoleukodystrophy,ALD)基因的3號外顯子全編碼區(qū),通過觀察其有效擴增率來比較不同裂解體系的細胞裂解效率.第二部分:單細胞PCR在單基因病植入前診斷研究中的應用:在建立了高效單細胞PCR體系的基礎上,我們以人單個淋巴細胞或人胚胎單卵裂球為研究對象,選取了幾種該實驗室已經(jīng)建立了基因診斷方法、發(fā)病率較高、較為典型的幾種單基因病進行研究.上述研究結(jié)果表明,以堿裂解為基礎的單細胞PCR體

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