鷹嘴豆金屬硫蛋白對鉛細胞毒性的干預研究.pdf

1、目的：探討一種從新疆地產(chǎn)藥食兼用植物鷹嘴豆中提取純化金屬硫蛋白用于鉛防治的方法，并進一步觀察不同濃度外源性植物金屬硫蛋白對鉛染毒淋巴細胞和海馬神經(jīng)元細胞作用不同時間的拮抗效應，為預防和治療鉛中毒提供理論依據(jù)。
　　方法：采用紫外掃描對鷹嘴豆金屬硫蛋白提取液進行定性鑒定，使用鎘-血紅蛋白飽和法以及火焰原子吸收（AAS）法對鷹嘴豆中金屬硫蛋白的含量進行測定，采用凝膠過濾層析技術初步純化鷹嘴豆中的金屬硫蛋白。將純化的鷹嘴豆-金屬硫蛋白配

2、制成不同濃度溶液對染毒鉛的Wistar大鼠淋巴細胞和海馬神經(jīng)元細胞進行體外干預實驗，觀察外源性鷹嘴豆金屬硫蛋白拮抗鉛毒性的效果。實驗中用50μmol/L的醋酸鉛對淋巴細胞和海馬神經(jīng)元細胞進行染毒，將金屬硫蛋白分成三個濃度組：高劑量組100μmol/L、中劑量組1μmol/L、低劑量組0.01μmol/L進行干預，同時設陰性對照與陽性對照組，陰性對照組細胞不做任何處理，陽性對照組細胞只染毒鉛。采用MTT法測定不同作用時間（24h、48h、

3、72h）各組淋巴細胞和海馬神經(jīng)元細胞存活率；通過流式細胞技術觀察細胞凋亡情況；應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測細胞外液中乳酸脫氫酶（LDH）活性、金屬硫蛋白及總蛋白含量；并用原子吸收光譜法測定細胞中鉀離子及鉛離子含量。
　　結果：1）鷹嘴豆中金屬硫蛋白含量為0.16mg/g；鎘-金屬硫蛋白在255nm處有一吸收峰；純化的金屬硫蛋白含量達91.30％。2）與醋酸鉛染毒組相比72h金屬硫蛋白高劑量干預組細胞存活率增高（P<0.05）；金屬硫蛋白

4、24h高劑量干預組，48h中、高劑量干預組與72h各劑量干預組海馬神經(jīng)元細胞存活率較醋酸鉛染毒組增高（P<0.05），不同劑量金屬硫蛋白干預24h后，海馬神經(jīng)元細胞凋亡率均有所下降。3）與醋酸鉛染毒組相比，高、中劑量金屬硫蛋白作用72h后，淋巴細胞上清液中LDH活性降低（P<0.05），金屬硫蛋白24h中劑量干預組、48h高劑量與中劑量干預組、72h各劑量干預組鉀離子含量降低（P<0.05）；與醋酸鉛染毒組相比，海馬神經(jīng)元細胞金屬硫蛋白

5、24h各劑量干預組、48h與72h中、高干預組細胞上清液中LDH活性降低（P<0.05），金屬硫蛋白干預24h高、中劑量組，48h與72h各劑量組海馬神經(jīng)元細胞鉀離子含量降低（P<0.05）。4）與醋酸鉛染毒組相比，淋巴細胞金屬硫蛋白干預各劑量組不同時間金屬硫蛋白含量均增加（P<0.05），金屬硫蛋白24h、48h高、中劑量干預組和72h高劑量干預組淋巴細胞總蛋白含量升高（P<0.05）；金屬硫蛋白干預各劑量組不同時間海馬神經(jīng)元細胞金屬

6、硫蛋白含量均增加（P<0.05），與醋酸鉛染毒組相比，金屬硫蛋白干預24h各劑量組、48h中、高劑量組與72h中、高劑量組海馬神經(jīng)元細胞總蛋白含量升高（P<0.05）。5）與醋酸鉛染毒組相比，金屬硫蛋白干預24h高、中組，48h與72h各劑量組淋巴細胞中鉛離子含量降低（P<0.05）；金屬硫蛋白干預24h高劑量組、48h與72h各劑量組海馬神經(jīng)元細胞鉛離子含量降低（P<0.05）。
　　結論：一定劑量范圍內(nèi)金屬硫蛋白可促進淋巴細胞