富血小板血漿對兔燙傷創(chuàng)面愈合的實驗研究.pdf

1、目的:通過建立兔燙傷模型,并應(yīng)用兔自體富血小板血漿(PRP)治療燙傷創(chuàng)面,觀察燙傷創(chuàng)面的愈合情況,探討兔自體富血小板血漿對燙傷創(chuàng)面愈合的作用機制。
　　 方法:(1)PRP凝膠制作:實驗前1d,利用Landesberg法,以200g力離心兩次制作PRP,PRP制作的全過程嚴(yán)格無菌。PRP與凝血劑和少許空氣(有利于PRP凝固)混合,6-10s后,PRP凝成膠狀物。(2)將24只大白兔隨機分為實驗組和對照組,每組為12只,平均體重分

2、別為(2.64±0.53)Kg、(2.73±0.52)Kg,雌雄不限。分別用4％硫化鈉脫去大白兔背上毛,然后使用92℃恒溫水浴燙其背部10s,制作大白兔兩側(cè)深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面,每側(cè)面積約7cm×10cm,深度經(jīng)組織學(xué)證實。兩組均于燙傷后1h內(nèi)腹腔注射生理鹽水30 mL／kg以抗休克。燙傷后6h內(nèi),實驗組將富血小板血漿凝膠均勻鋪于創(chuàng)面上,厚度約1mm,外用3M薄膜包扎、邊緣縫合；對照組外涂磺胺嘧啶銀。(3)利用計算機全自動圖像分析系統(tǒng)求出創(chuàng)面

3、愈合面積與總面積之比,即創(chuàng)面愈合率。(4)每組分別于實驗后的7、10、14d隨機選取4只大白兔麻醉后處死,每個創(chuàng)面取創(chuàng)面中央及前后創(chuàng)面邊緣共三個點,將皮膚完整取出后置于4％多聚甲醛中固定,乙醇逐級脫水,石蠟包埋、切片,并行HE染色,光鏡下觀察表皮及真皮愈合情況。(5)每組7、10、14d組織病理切片顯微鏡下計數(shù)5個視野下微細(xì)血管數(shù)量,對比各組切片中微血管數(shù)量差異。(6)采用免疫組化方法檢測bFGF、VEGF的表達(dá),采用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對

4、免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析。(7)統(tǒng)計學(xué)處理:所有數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)表示,實驗組與對照組進(jìn)行t檢驗。P<0.05為差異有顯著性。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成。
　　 結(jié)果:1.創(chuàng)面大體觀察:經(jīng)兩種方法治療后,燙傷創(chuàng)面面積隨傷后時間延長而逐漸縮小,其中以實驗組治療的創(chuàng)面愈合更為明顯。實驗組,第7d,PRP凝膠牢固粘合創(chuàng)緣,創(chuàng)面滲出減少。可見創(chuàng)緣有上皮生長,第10d,創(chuàng)面滲出顯著減少,創(chuàng)緣上皮生長明顯,第14d,創(chuàng)

5、面干燥,創(chuàng)面明顯縮小,愈合部分質(zhì)地軟,無明顯瘢痕形成。對照組,第7d,創(chuàng)面滲出較多,部分創(chuàng)面可見膿性分泌物,第10d,創(chuàng)面滲出略減少,部分創(chuàng)面加深變黑,第14d,創(chuàng)面干燥,部分磺胺嘧啶銀脫落,創(chuàng)面縮小。2.鏡下創(chuàng)面組織學(xué)變化:第7d,實驗組和對照組創(chuàng)面可見表皮細(xì)胞增殖,創(chuàng)面內(nèi)新生毛細(xì)血管、成纖維細(xì)胞已形成,并見較多炎癥細(xì)胞浸潤,但實驗組創(chuàng)面肉芽組織灶更明顯,細(xì)胞及血管含量更豐富；第10d,實驗組較對照組創(chuàng)緣上皮增殖更明顯,創(chuàng)面內(nèi)成纖維細(xì)

6、胞及毛細(xì)血管數(shù)目更多；第14d,實驗組創(chuàng)面新生表皮細(xì)胞已基本覆蓋傷口,并可見明顯角化,創(chuàng)面組織中成纖維細(xì)胞大部分轉(zhuǎn)化為纖維細(xì)胞,毛細(xì)血管數(shù)少于對照創(chuàng)面,對照組創(chuàng)面成纖維細(xì)胞增殖尚較活躍,纖維細(xì)胞數(shù)目少。3.微血管計數(shù):取試驗組及對照組第7、10、14d組織切片,隨機計數(shù)5個顯微鏡視野下微血管數(shù)量取其均值作為該標(biāo)本的微血管數(shù)。7、10d,實驗組微血管數(shù)均高于對照組,兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),14d,實驗組微血管數(shù)低于對照組

7、,兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4.創(chuàng)面愈合率對比:7、10、14d實驗組創(chuàng)面愈合率均較對照組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。5.免疫組化結(jié)果:應(yīng)用免疫組化SP法,以細(xì)胞漿或(和)細(xì)胞核中著棕色者為陽性細(xì)胞。bFGF及VEGF的半定量測定:在200倍光鏡下觀察7、10、14d免疫組織化學(xué)結(jié)果,隨機選取5個視野,每個視野觀察100個細(xì)胞,計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)。7、10d,bFGF及VEGF陽性細(xì)胞數(shù)兩組均增高,實驗組明顯高于對