脂肪組織局部缺氧對(duì)MCP-1表達(dá)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：本課題旨在體外和整體水平探討脂肪組織局部缺氧對(duì)MCP-1表達(dá)的影響及其可能的分子機(jī)制。
　　 方法：本課題分為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩部分。第一部分為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，利用氯化鈷（CoCl2）誘導(dǎo)小鼠3T3-L1 成熟脂肪細(xì)胞低氧模型以及誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞低氧分化，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)法（Real-time PCR）、蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)低氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）的表達(dá)水平；Real-time PCR、酶聯(lián)免疫

2、吸附法（ELISA）測(cè)定單核細(xì)胞趨化因子（MCP-1）的表達(dá)水平，并分析HIF-1α與MCP-1 在蛋白水平上的相關(guān)性。第二部分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，利用高脂高果糖飼料喂養(yǎng)ICR 小鼠12 周，建立伴肥胖的2 型糖尿?。═2DM）模型。每4 周測(cè)定空腹血糖（FBG）及體重； 12 周末進(jìn)行腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT）并測(cè)定血漿胰島素水平，血漿總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）水平及血

3、漿尿酸（uric acid）水平。Western Blot和ELISA 分別檢測(cè)小鼠大網(wǎng)膜脂肪組織HIF-1α及MCP-1 蛋白水平。
　　 結(jié)果：（1）100μmol/L CoCl2 誘導(dǎo)成熟3T3-L1 脂肪細(xì)胞低氧，從而上調(diào)MCP-1 的分泌；（2）在常氧條件下，隨著3T3-L1 前脂肪細(xì)胞分化成熟，HIF-1α蛋白表達(dá)水平逐漸降低而培養(yǎng)液中MCP-1 蛋白水平逐漸升高；在100μmol/L CoCl2 誘導(dǎo)的低氧條件下，

4、HIF-1α蛋白表達(dá)水平及培養(yǎng)液中MCP-1 蛋白水平與分化前無(wú)顯著差異；（3）高脂高果糖組小鼠體重高于對(duì)照組小鼠體重的20％，且空腹血糖平均值高于7.8mmol/L，示伴肥胖的T2DM模型造模成功；（4）模型組小鼠大網(wǎng)膜脂肪組織HIF-1α及MCP-1 蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組小鼠。
　　 結(jié)論：（1）3T3-L1 成熟脂肪細(xì)胞在低氧條件下升高M(jìn)CP-1 分泌水平，提示脂肪細(xì)胞低氧可能是脂肪組織發(fā)生低度炎癥反應(yīng)的重要機(jī)制之一；