干細胞表面標記(CD90)與肺癌順鉑耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　肺癌(Lung cancer)是當今社會最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率及死亡率一直處于居高不下的狀態(tài),其5年生存率大約為15％[1],引起肺癌患者低生存率的原因之一是腫瘤細胞對化療藥物形成耐藥。因此,探索化療耐藥形成原因并尋找相應(yīng)的防治方法必將提高肺癌療效,并使眾多肺癌患者獲益。
　　腫瘤干細胞(cancer stem cells,CSCs)學說的提出為腫瘤發(fā)生機制的研究提供了新的思路,也為腫瘤化療耐藥機制研究提供

2、了新的視角。腫瘤干細胞是在腫瘤細胞和組織中發(fā)現(xiàn)有著干細胞特性的小細胞群,該群細胞與其他類型干細胞特點相似,均具有多向分化潛能和自我更新能力。目前認為腫瘤干細胞是腫瘤發(fā)生的根源。許多研究證實腫瘤干細胞在腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、侵襲、復(fù)發(fā)和耐藥中具有重要的作用[2]。
　　已有研究表明化療耐藥、自我更新能力和多向分化潛能均是腫瘤干細胞的重要特性[3][4]。而且,腫瘤干細胞耐化療的特性是促使腫瘤化療后復(fù)發(fā)的重要因素。因此,深入研究腫瘤干細胞

3、與化療耐藥之間的關(guān)系,必將為逆轉(zhuǎn)腫瘤的化療耐藥提供新的理論依據(jù),有助于在腫瘤的根治方面取得突破性的進展。
　　以細胞表面特異性分子標記和側(cè)群細胞(side population,SP)為標志的分離方法是富集腫瘤干細胞的主要手段。目前大量研究提示間充質(zhì)干細胞標記CD90是重要的肝癌干細胞分子表面標記物,而CD90是否是肺癌干細胞標記尚缺乏相關(guān)研究[5][6]。
　　在前期研究中,我們課題組運用懸浮球培養(yǎng)方法高效分離和富集出肺癌

4、干細胞,進一步的研究發(fā)現(xiàn):與肺腺癌細胞系A(chǔ)549相比,A549細胞球的腫瘤干細胞標記物CD90的表達較高。通過平皿克隆形成試驗、成球試驗、裸鼠移植瘤實驗提示CD90+A549細胞自我更新能力及體內(nèi)成瘤能力均強于 CD90-A549細胞,初步證實CD90有可能是肺癌干細胞的分選標記。本研究試圖通過研究CD90與肺癌順鉑(cisplatin,CDDP)耐藥的相關(guān)性,從耐藥角度探討CD90是否是肺癌干細胞標記。
　　目的:
　　研

5、究CD90與A549細胞順鉑耐藥的相關(guān)性,在耐藥角度探討CD90是否是肺癌干細胞分子標志物。
　　方法:
　　1、通過成球?qū)嶒?、CCK-8、平皿克隆實驗分別檢測A549、A549/CDDP細胞的成球能力、體外增殖能力及克隆形成能力,初步探討細胞干性與肺癌細胞耐藥之間的關(guān)聯(lián);
　　2、在上述研究基礎(chǔ)上,流式細胞儀檢測干細胞標志物CD90在A549、A549/CDDP貼壁細胞及細胞球中的比例,觀察并比較兩者之間的差異。

6、r>　　3、流式分選CD90+A549、CD90-A549細胞,然后通過細胞毒性試驗、裸鼠移植瘤試驗從體內(nèi)外分別比較兩者的順鉑耐藥性。進一步研究CD90與肺癌耐藥相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1、A549/CDDP細胞較親代A549細胞在成球能力、體外細胞增殖能力及克隆形成能力方面均顯著增強(p<0.05);
　　2、在貼壁細胞和細胞球中,A549/CDDP所含CD90陽性細胞比例均顯著高于親代A549細胞(p<0.05)

7、;
　　3、在細胞毒性實驗及體內(nèi)裸鼠移植瘤實驗中, CD90+A549細胞的順鉑耐藥性均顯著強于CD90-A549細胞(p<0.05);
　　結(jié)論:
　　與親代A549細胞相比,A549/CDDP細胞的自我更新能力顯著增強,且CD90+亞群細胞的比例顯著增高;CD90+A549細胞的 CDDP耐藥性顯著強于 CD90-A549細胞;從不同方面均提示 CD90高表達與 A549肺癌細胞順鉑耐藥相關(guān),進而從耐藥角度提示CD