穴位埋線、穴位注射對2型糖尿病大鼠腺衍生因子促凋亡途徑的影響.pdf

1、目的：
　　2型糖尿病對人類健康構成巨大威脅，其具有危害大、難根治、費用高的特點，是當前我國第四位致死原因。而胰島β細胞功能障礙是2型糖尿病發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。如何保護胰島β細胞功能是治療2型糖尿病的關鍵，對于預防糖尿病及其并發(fā)癥具有重要意義。本文利用高脂高糖飼料加小劑量鏈脲佐菌素復制2型糖尿病動物模型，研究穴位注射、穴位埋線對2型糖尿病大鼠空腹血糖、體重、血清胰島素、胰島素敏感指數(shù)、及胰腺衍生因子（PANDER）促凋亡途徑的干預作用

2、，探討穴位注射、穴位埋線保護胰島β細胞功能的機制，從分子水平研究其對2型糖尿病的作用機制，為穴位埋線和穴位注射治療2型糖尿病及臨床篩選治療方法提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　將50只雄性SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分成普食組和造模組。普食組用普通飼料喂養(yǎng)，造模組用高糖高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)4周后，造模組大鼠按體重35mg∕kg右側腹腔注射鏈脲佐菌素復制2型糖尿病大鼠動物模型。在造模同時，普食組注射等量檸檬酸緩沖液，72小時后測

3、量各組大鼠空腹血糖，體重，血糖值大于或等于11.1mmol／L為2型糖尿病大鼠，將造模成功的大鼠按隨機數(shù)字表法分為模型組、穴位注射組、穴位埋線組，同時將普食組大鼠作為正常對照組。穴位埋線組予雙側足三里、三陰交、胃脘下俞埋線，每周一次，連續(xù)治療4周，穴位注射組在相同穴位注射參麥注射液，隔日一次，連續(xù)治療14次，共4周。正常組和模型組大鼠不予治療，但兩組大鼠相同時間，相同方法抓取固定。治療4周后，觀察各組大鼠的血糖、血清胰島素、胰島素敏感指

4、數(shù)。胰腺切片作HE染色，觀察胰島形態(tài)學變化。采用real time PCR檢測各組大鼠胰腺組織
　　PANDERmRNA、p21mRNA、Caspase-3mRNA表達，western blot檢測PANDER蛋白、P21蛋白、Caspase-3蛋白的表達。對上述結果進行綜合統(tǒng)計分析。
　　結果:
　　1.各組大鼠基本生化資料：
　　(1)造模組大鼠經(jīng)用高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后，體重與空白對照組相比明顯升高（P<0

5、.01），注射鏈脲佐菌素72時后，造模組體重與空白對照組相比明顯降低（P<0.05）。
　　(2)從空腹血糖水平看，治療前穴位埋線組、穴位注射組和模型組空腹血糖均顯著高于正常對照組，但3組之間血糖無顯著性差異。治療后穴位埋線組、穴位注射組空腹血糖顯著低于模型組（P<0.01），2組比較有顯著性差異;提示穴位埋線、穴位注射均有降低血糖的作用。穴位注射組空腹血糖低于穴位埋線組，2組比較有顯著性差異（P<0.01），提示穴位注射組降低血

6、糖的作用優(yōu)于穴位埋線組。
　　(3)血清胰島素水平顯示，與正常對照組比較，模型組大鼠血清胰島素水平顯著上升(P<0.01)，與模型組比較，穴位埋線組及穴位注射組大鼠血清胰島素水平降低(P<0.01)，與穴位埋線組比較，穴位注射組血清胰島素水平降低(P<0.01)，提示穴位注射、穴位埋線可有效降低2型糖尿病大鼠血清胰島素水平，穴位注射對降低2型糖尿病大鼠血清胰島素作用優(yōu)于穴位埋線。
　　(4)從胰島素敏感指數(shù)水平看，與正常組比

7、較，模型組大鼠胰島素敏感指數(shù)水平明顯降低(P<0.01)，提示模型組具有胰島素抵抗。與模型組比較，穴位埋線組、穴位注射組胰島素敏感指數(shù)升高(P<0.01)，提示穴位注射、穴位埋線均可改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗，與穴位埋線組比較，穴位注射組胰島素敏感指數(shù)升高(P<0.01)，有統(tǒng)計學意義，提示穴位注射對改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗作用優(yōu)于穴位埋線。
　　2.相同視野的光學顯微鏡下，穴位埋線和穴位注射組大鼠胰腺組織內的胰島細胞損傷明

8、顯少于模型組，穴位注射組大鼠胰腺組織內的胰島細胞損傷少于穴位埋線組。
　　3.各組大鼠胰腺組織PANDERmRNA表達的影響：與正常組比較，模型組胰腺組織PANDERmRNA表達上升，差異有顯著性意義(P<0.01)；與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織PANDER mRNA的表達降低，差異有顯著性意義(P<0.01)；與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織PANDERmRNA表達降低，差異有顯著性意義(P<0.01)。

9、r>　　4.各組大鼠胰腺組織PANDER蛋白表達的影響：與正常組比較，模型組胰腺組織PANDER蛋白表達上升，差異有顯著性意義(P<0.01)；與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織PANDER蛋白表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)；與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織PANDER蛋白表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)。
　　5.各組大鼠胰腺組織p21mRNA表達的影響：與正常組比較，模型組
　　胰腺組

10、織p21mRNA表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)；與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織p21mRNA表達升高，差異有顯著性意義(P<0.01)；與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織p21mRNA表達升高，差異有顯著性意義(P<0.01)。
　　6.各組大鼠胰腺組織p21蛋白表達的影響：與正常組比較，模型組胰腺組織P21蛋白表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)；與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織P2

11、1蛋白表達上升，差異有顯著性意義(P<0.01)；與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織P21蛋白表達上升，差異有顯著性意義(P<0.01)。
　　7.各組大鼠胰腺組織Caspase-3mRNA表達的影響：與正常組比較，模型組胰腺組織Caspase-3mRNA表達上升，差異有顯著性意義(P<0.01)；與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織Caspase-3mRNA表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)；與穴位埋線組比較，

12、穴位注射組胰腺組織Caspase-3mRNA表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)。
　　8.各組大鼠胰腺組織Caspase-3蛋白表達的影響：與正常組比較，模型組胰腺組織Caspase-3蛋白表達上升，差異有顯著性意義(P<0.01)；與模型組比較，穴位埋線組與穴位注射組胰腺組織Caspase-3蛋白表達下降，差異有顯著性意義(P<0.01)；與穴位埋線組比較，穴位注射組胰腺組織Caspase-3蛋白表達下降，差異有顯著性意

13、義(P<0.01)。
　　結論：
　　1.穴位埋線、穴位注射能有效降低血糖，改善2型糖尿病大鼠胰島β細胞形態(tài)和分泌功能，增加胰島素的敏感性，起到治療2型糖尿病的作用。
　　2.2型糖尿病胰島素抵抗致使機體在餐后長時間處于高血糖狀態(tài)，激活了β細胞內的PANDER基因表達與分泌，同時胰島素抵抗時，β細胞代償性增殖，其分泌代償性增多，所以胰島素分泌增加。由于PANDER和胰島素同時分泌，所以胰島β細胞分泌的PANDER水平也

14、會相應增加，PANDER的生理功能是促進胰島β細胞凋亡，而PANDER誘導β細胞凋亡的機制主要表現(xiàn)為Caspase-3的激活及p21表達的抑制。過多表達分泌的PANDER激活Caspase-3表達，過表達的Caspase-3抑制p21表達，從而誘導細胞凋亡，損傷胰島β細胞功能，加重2型糖尿病的進程。
　　3.穴位注射、穴位埋線或許通過降低血糖，從而抑制高血糖對胰島β細胞PANDER基因轉錄的激活，減少胰腺組織PANDER表達，促進