自噬-Cathopsin L激活機制在姜黃素誘導的K562細胞死亡中的作用.pdf

1、目的： 研究自噬/Cathepsin L激活機制在姜黃素(Curcumin)誘導的K562細胞死亡中的作用，初步探討自噬和溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)在其中的作用機制。 方法： 用不同濃度的姜黃素處理入侵性粒細胞白血病細胞株K562細胞，采用MTT法測定姜黃素對K562細胞增殖的抑制作用，應用MDC熒光染色和Hoechst33258熒光染色觀察給藥后自噬和凋亡的發(fā)生：免疫組化、流式細胞儀和West

2、ern blot觀察自噬/Cathepsin L激活機制在姜黃素誘導的K562細胞死亡中的分子機制。 結果： 姜黃素對K562細胞生長有顯著的抑制作用，且此作用呈明顯的時間、劑量依賴性；Hoechst33258和MDC熒光染色結果顯示，姜黃素給藥后可誘導K562細胞發(fā)生凋亡和自噬；姜黃素誘導K562細胞發(fā)生自噬時，自噬特異性蛋白MAP LC3、Beclin 1被激活，Cathepsin L在K562細胞核內轉位激活，且其

3、蛋白表達增加；姜黃素誘導K562細胞發(fā)生凋亡時，抗凋亡蛋白Bcl-2表達下降、細胞線粒體膜電位下降、Bid被剪切激活成tBid、Caspase-3也被大量激活。用Z-FY-DMK預先抑制Cathepsin L后與姜黃素單獨給藥組相比顯示：姜黃素對K562細胞的抑瘤率下降、MAP LC3和Beclin 1表達減少、Bid剪切激活成tBid增加、線粒體膜電位下降幅度變大、Caspase-3激活增加。 結論： 姜黃素能明顯抑制

4、K562細胞的生長，并誘導其先后發(fā)生自噬和凋亡。在姜黃素誘導的K562細胞死亡過程中Cathepsin L發(fā)揮重要作用，它一方面激活自噬發(fā)揮抑瘤作用；另一方面可能通過抑制凋亡發(fā)揮保護作用。用Z-FY-DMK預先抑制Cathepsin L與姜黃素單獨給藥組相比，MAP LC3和Beclin 1表達減少、Bid剪切激活成tBid及Caspase-3激活增加、線粒體膜電位下降幅度變大，但是，抑瘤率卻明顯降低，說明Cathepsin L對K56