RASSF1A基因和SOCS-1基因在骨髓增生異常綜合征患者中異常甲基化的研究.pdf

1、背景:骨髓增生異常綜合征(MDS)是起源于造血干細(xì)胞的一組高度異質(zhì)性克隆性疾病，以一系或多系血細(xì)胞病態(tài)造血及無(wú)效造血，高風(fēng)險(xiǎn)向急性白血病轉(zhuǎn)化為特征。MDS的疾病進(jìn)展是多因素多基因異常改變累積的過(guò)程，其發(fā)病機(jī)制尚未明確，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的改變，特別是原癌基因突變或者抑癌基因失活，在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。研究發(fā)現(xiàn)DNA甲基化是可逆的改變，逆轉(zhuǎn)基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化能夠使沉默基因重新表達(dá)，成為惡性血液病治療的新靶點(diǎn)。新

2、近確定的抑癌基因RASSF1A和SOCS-1是當(dāng)前腫瘤領(lǐng)域的新熱點(diǎn)，大量研究表明RASS1A和SOCS-1基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，但其對(duì)MDS的影響國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 目的:本研究通過(guò)檢測(cè)骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓RASSF1A基因和SOCS-1基因的表達(dá)水平及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)，探討RASSF1A和SOCS-1基因異常甲基化在MDS發(fā)生發(fā)展中的作用，并通過(guò)研究地西他濱治療前后抑癌基

3、因甲基化狀態(tài)的變化，為去甲基化藥物治療MDS提供新靶點(diǎn)。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)組選取30例MDS患者入組，對(duì)照組選取非惡性血液病患者15例入組，按MDS國(guó)際IPSS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行分組。采用Ficoll液分選骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)，按照基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書提取患者骨髓血單個(gè)核細(xì)胞的DNA以及RPMI8226細(xì)胞株和U266細(xì)胞株的DNA，采用TrizolRNA提取液提取總RNA，應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MS-P

4、CR)、逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法檢測(cè)兩組患者骨髓RASSF1A基因和SOCS-1基因mRNA表達(dá)水平及啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)。收集地西他濱治療前后患者骨髓血的同等量DNA進(jìn)行MS-PCR和電泳，采用捷達(dá)凝膠系統(tǒng)和ImageJ軟件對(duì)條帶進(jìn)行灰度分析，以目的基因與內(nèi)參基因的比值代表PCR產(chǎn)物的相對(duì)含量，對(duì)比地西他濱治療前后MDS患者RASSF1A基因和SOCS-1基因的甲基化情況。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組RASSF1A基因甲基化率(7

5、3.33％)明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），且中高危MDS患者骨髓RASSF1A基因甲基化率(81.8％)明顯高于低危MDS患者(18.2％)(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組RASSF1A基因mRNA表達(dá)水平(40％)明顯低于對(duì)照組(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組SOCS-1基因甲基化率(53.33％)明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），且中高危MDS患者骨髓SOCS-1基因甲基化率(65.2％)明顯高于低危MDS患者(14.3％)(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組

6、SOCS-1(46.7％)基因mRNA表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）;經(jīng)地西他濱治療后MDS患者RASSF1A基因和SOCS-1基因的甲基化程度較初診時(shí)降低。
　　 結(jié)論:MDS患者骨髓RASSF1A基因和SOCS-1基因的異常甲基化與該基因的表達(dá)失活緊密相關(guān)，可能是MDS發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一，檢測(cè)RASSF1A基因和SOCS-1基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)有望成為判定MDS病情進(jìn)展的新指標(biāo)，指導(dǎo)MDS的臨床診治和預(yù)后轉(zhuǎn)歸;地