近江牡蠣糖胺聚糖體內(nèi)抗腫瘤活性、毒理評價及口服液的研制.pdf

1、目的：
　　本文主要以新鮮的近江牡蠣全臟器為原料，酶解提取近江牡蠣糖胺聚糖（Crassostrea Rivularis glycosaminoglycan），進行其體內(nèi)抗腫瘤活性、安全毒理學(xué)評價，以及牡蠣多糖口服液的研究。
　　方法：
　　1.體內(nèi)抗腫瘤試驗方法：采用動物體內(nèi)移植性腫瘤篩選抗腫瘤藥物的方法，選用S180肉瘤、艾氏癌腹水型（EAC）、L1210小鼠白血病三種瘤株，觀察近江牡蠣糖胺聚糖對KM小鼠體內(nèi)三種腫瘤

2、細胞的影響作用。
　　2.安全毒理學(xué)評價：
　?、偌毙远拘栽囼灒喊凑兆畲竽褪軇┝糠?，設(shè)定CG的劑量為21.50 g/kg?BW，灌胃于KM小鼠后，連續(xù)觀察14 d，記錄中毒癥狀和死亡情況。②Ames試驗：采用組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌四種菌株TA97、TA98、TA100、TA102進行試驗，設(shè)5個劑量組即5000、1000、200、40、8μg/皿，統(tǒng)計各組回復(fù)突變菌落數(shù)。③小鼠骨髓細胞微核試驗：設(shè)置劑量為10、5、2

3、.5 g?kg-1，計數(shù)每只動物中1000個嗜多染紅細胞，記錄含微核的嗜多染紅細胞數(shù)，觀察200個細胞中嗜多染紅細胞與成熟紅細胞（PCE/RBC）比值。④小鼠精子畸形試驗：試驗劑量10、5、2.5 g?kg-1，每只小鼠計數(shù)1000個精子，記錄畸形精子的數(shù)量。
　　3.近江牡蠣多糖口服液的研制方法：①采用蜂蜜、檸檬酸作為甜味劑和酸味劑，利用酵母粉發(fā)酵除腥，設(shè)計正交試驗，研究蜂蜜、檸檬酸、牡蠣多糖添加量三個因素對口服液口感的影響。②

4、口服液相關(guān)指標的檢測：利用阿利新藍比色法測定糖胺聚糖的含量；利用《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定進行裝量檢查；按照《中國藥典》2010年版二部附錄VI H pH值測定法測定pH；參照2003版《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》測定重金屬和微生物的含量。
　　結(jié)果：
　　1.體內(nèi)抗腫瘤試驗：
　　（1）對荷 S180實體瘤小鼠的影響：①CG三個劑量組（50 mg/kg、100mg/kg、200mg/kg）與陰性對照組相比

5、，均能降低小鼠的實體瘤重量。其中CG100mg/kg劑量組差異極顯著（P<0.01），抑瘤率最高達到44.66％；CG200mg/kg差異顯著（P<0.05）。CG100mg/kg能協(xié)同增強CTX的抑瘤效果。②對小鼠免疫器官的影響：CG各劑量組均能增加小鼠的脾指數(shù)，CG50mg/kg、100mg/kg劑量組能增加小鼠的胸腺指數(shù)，各劑量組與陰性對照組相比，無顯著差異（P<0.05）；其中CG100mg/kg能拮抗CTX引起的脾指數(shù)和胸腺指

6、數(shù)降低，修復(fù)CTX造成的免疫損傷。
　　（2）對荷白血病L1210腹水瘤小鼠的影響：CG各劑量組均能延長荷瘤小鼠的平均生命期，其中CG100mg/kg生命延長率最高達到12.45%；其中CG100mg/kg對CTX起到協(xié)同增敏作用，將小鼠的生命延長率從30.75%提高到50.27%。腹圍測定的結(jié)果顯示，CG各劑量組小鼠的腹圍均少于陰性對照組，但無統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果與生命延長率相比較有一定的相關(guān)性。
　?。?）對荷艾氏腹水癌EA

7、C小鼠的影響：CG各劑量組均能延長荷瘤小鼠的平均生命期，且隨劑量的增加其生命延長率也在增加，CG200mg/kg生命延長率最高達到18.66%；與生理鹽水對照組比較，CG（100mg/kg、200mg/kg）差異顯著（P<0.05）；合用組體現(xiàn)了協(xié)同增敏作用，將小鼠的生命延長率從47.92%提高到55.27%。腹圍測定的結(jié)果顯示，各用藥組小鼠腹圍均少于生理鹽水對照組。
　　2.安全毒理學(xué)試驗：
　?。?）急性毒性試驗結(jié)果表明

8、，試驗期間未觀察到小鼠的死亡及中毒癥狀，經(jīng)口最大耐受劑量大于21.50 g/kg?BW。
　?。?）Ames試驗的結(jié)果表明，CG無致突變作用；小鼠骨髓細胞微核試驗的結(jié)果表明，CG對骨髓嗜多染紅細胞微核形成率無顯著影響；小鼠精子畸形試驗的結(jié)果表明，CG對小鼠精子畸形率無顯著影響。三項遺傳毒理學(xué)的試驗結(jié)果皆呈陰性，表明近江牡蠣糖胺聚糖無明顯遺傳毒性。
　　3.近江牡蠣多糖口服液的研制：①通過正交試驗優(yōu)化，確定最佳口感配方為酵母粉

9、（2%，30 min），牡蠣多糖添加量5 mg/mL，7%蜂蜜，0.15%檸檬酸；②口服液的質(zhì)量標準：澄清透明的淺黃色、黃色液體，無腥味、有香甜味，較適口、酸甜適中，口感圓滑，糖胺聚糖濃度398μg/mL，pH4.5~5.5，鎘（以Cd計）≤0.2 mg/L，鉛（以Pb計）≤0.2 mg/L，菌落總數(shù)≤100 CFU/mL，大腸菌群≤3 CFU/mL。
　　結(jié)論：
　?。?）近江牡蠣糖胺聚糖對S180肉瘤、艾氏癌腹水型（EA