大豆異黃酮對(duì)體外關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：探討不同濃度大豆異黃酮對(duì)體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的影響，進(jìn)一步揭示大豆異黃酮在骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨退變中的作用。 方法： 1、取3周齡、雌性幼兔三只，無(wú)菌條件下切取股骨頭、股骨髁部關(guān)節(jié)軟骨，分離軟骨細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)傳代，將第一代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分成陽(yáng)性對(duì)照組(17p-E<,2>組，E<,2>組)、陰性對(duì)照組(溶媒對(duì)照組)、10<'-5>mol/L～10<'-10>mol/L SI組，共8組，分別以每孔2×10<'3>個(gè)軟骨細(xì)胞接種于

2、96孔板，每組平行4孔；以每孔1×10<'4>個(gè)軟骨細(xì)胞接種于24孔，每組平行3孔，每孔底部預(yù)先放入無(wú)菌5mm×5mm蓋玻片。48h細(xì)胞貼壁后予以不同濃度藥物干預(yù)，隔天換藥一次，每天取一塊96孔板進(jìn)行MTT測(cè)定，連續(xù)測(cè)定8天；藥物干預(yù)一周后取出24孔板內(nèi)蓋玻片分別行雌激素β受體免疫組織化學(xué)染色、甲苯胺藍(lán)染色和瑞氏染色。 2、取第一代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分成A、B兩組，B組先用IL-β<,1>干預(yù)，每組又分成E<,2>組、溶媒對(duì)照組、10

3、<'-5>mol/L～l0<'-10>mol/L SI組，共8個(gè)亞組，以每孔2×10<,5>個(gè)細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，每亞組平行2孔，48h后，A組予以不同濃度藥物干預(yù)5天，B組先以10ng/ml IL-β<,1>干預(yù)24h后予以不同濃度藥物干預(yù)5天，隔天換藥一次。提取培養(yǎng)軟骨細(xì)胞總RNA，RT-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、biglycan、TGF-β<,1>、IGF-1 mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、MTT結(jié)果顯示

4、：各組24小時(shí)內(nèi)作用無(wú)明顯差異(p>0.05)：10<'-5>mol/LSI 組從 24 小時(shí)后測(cè)得的 OD 值與溶媒對(duì)照組和E<,2>組的OD值有顯著性差別(p<0.05)。10<,-6>mol/L、10<,-10>mol/L SI組的OD值與與溶媒對(duì)照組的OD值無(wú)明顯差別，從24小時(shí)后測(cè)得的OD值與17β-E<,2>組的OD值有顯著性差別(p<0.05)。10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L

5、SI組從48小時(shí)后測(cè)得的OD值與溶媒對(duì)照組的OD值有顯著性差別(p<0.05)。雌激素β受體免疫組化顯示未滴加一抗的爬片無(wú)棕黃色顆粒，其余各組均有雌激素β受體表達(dá)，陽(yáng)性在體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞中有棕黃色深染顆粒存在于細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞核內(nèi)。甲苯胺藍(lán)染色顯示胞漿中有不同程度的紫紅色顆粒，體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞中蛋白多糖存在。 2、SI對(duì)軟骨細(xì)胞mRNA表達(dá)的影響：正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞均有biglycan、Ⅱ型膠原、FGF-β<,1>mRNA表

6、達(dá)，10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L SI能刺激正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞mRNA表達(dá)，而10<'-5>mol/L SI則起抑制作用；IL-1β抑制軟骨細(xì)胞biglycan、II型膠原、TGF-β<,1>mRNA的表達(dá)，10<'-5>mol/L SI能協(xié)同IL-1β起抑制作用，10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L SI能部分對(duì)抗IL-1β的抑制作用。10<'-5>mol/L、10<,-6>

7、mol/L、10<'-7>mol/L SI能刺激正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞表達(dá)Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)，變性老化的軟骨細(xì)胞都有Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)，其中10<,-8>mol/L、10<'-9>mol/L SI能部分對(duì)抗IL-1β的作用。10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L SI能誘導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞表達(dá)IGF-1mRNA。10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L SI能誘導(dǎo)變性關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞表達(dá)IGF-1

8、mRNA。 結(jié)論： 1、不同濃度SI對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的作用表現(xiàn)出雙重作用，10<'-5>mol/L的SI抑制軟骨細(xì)胞的增殖；而10<'-7>mol/L、10<'-8>mol/L、10<'-9>mol/L的SI促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖，且隨著濃度的增加作用增加。 2、不同濃度SI對(duì)軟骨細(xì)胞膠原、蛋白多糖、IGF-1、TGF-βl mRNA表達(dá)的作用不同。 3、體外關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞存在雌激素受體，SI對(duì)軟骨細(xì)胞的作用與雌