腺病毒介導的成纖維細胞分泌內皮抑素聯(lián)合順鉑對惡性黑色素瘤作用的實驗研究.pdf

1、目的：對血管形成進行干涉是腫瘤臨床治療的有效手段。1997年，MichaelS.O'Reilly博士從腫瘤老鼠的尿中發(fā)現了Endostatin，命名為內皮抑素。研究顯示內皮抑素可多靶點發(fā)揮抗血管生成作用，從而導致腫瘤的休眠及退縮。.但內皮抑素性質不穩(wěn)定，易失活，難以大量制備；且需每日給藥，較為繁瑣。解決上述困難較好的辦法就是采取基因治療的方法。利用腺病毒載體介導內皮抑素的方法成為了研究的熱點。為了保證腺病毒介導的內皮抑素高效表達，我們將

2、已構建成功的人分泌性內皮抑素腺病毒載體轉染成纖維細胞，使其分泌有活性的內皮抑素。體外實驗表明感染重組腺病毒后的成纖維細胞表達分泌的內皮抑素能抑制血管內皮細胞(ECV304)的增殖。本研究的目的是(1)測定腺病毒介導的成纖維細胞體內分泌內皮抑素的水平；(2)觀察腺病毒介導的成纖維細胞分泌內皮抑素聯(lián)合順鉑對B16惡性黑色素瘤裸鼠移植瘤生長的影響。 方法：(1)以表達人內皮抑素的重組腺病毒感染成纖維細胞，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

3、對感染后的成纖維細胞體內及體外分泌內皮抑素的水平進行測定。(2)用B16惡性黑色素瘤細胞株建立裸鼠的腫瘤移植模型，隨機分組并設立對照，分別予人內皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞、人內皮抑素重組腺病毒、順鉑、重組人內皮抑素、人內皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞聯(lián)合順鉑、重組人內皮抑素聯(lián)合順鉑及轉染空載體的腺病毒感染的成纖維細胞進行干預，計算腫瘤體積及抑瘤率，免疫組化法測微血管密度(MVD)及瘤體VEGF的表達。數據采用SPSS10.0軟件

4、進行統(tǒng)計分析。 結果：(1)注射人內皮抑素重組腺病毒感染后的成纖維細胞24小時后，小鼠體內的內皮抑素水平即升至113.4ng/ml，直到第六天濃度恢復至注射前水平。(2)在裸鼠的惡性黑色素瘤移植模型上，與對照組的裸鼠比較，注射人內皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞組、人內皮抑素重組腺病毒組、順鉑組、重組人內皮抑素組、人內皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞聯(lián)合順鉑組及重組人內皮抑素聯(lián)合順鉑組的抑瘤率分別為53.41％、35.06％、4

5、5.72％、17.52％、84.64％和59.40％，腫瘤的生長明顯受到抑制(p<0.05)。感染的成纖維細胞組腫瘤體積與重組腺病毒組、重組人內皮抑素組相比減小(p<0.05)。各聯(lián)合組的腫瘤生長受抑與順鉑組間有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。免疫組化結果顯示對照組腫瘤的微血管密度及VEGF的表達最高，與其它各組之間均有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，感染的成纖維細胞組腫瘤的微血管密度與重組腺病毒組、重組人內皮抑素組相比降低(p<0.05).各