Noxa在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、背景及目的:胃癌是我國乃至全球最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,盡管近年因治療手段不斷改進(jìn),但胃腺癌對化療藥物的耐受導(dǎo)致療效低下。因此,對胃癌進(jìn)行分子水平上的研究有可能為胃癌的治療提供新的幫助,從而達(dá)到提高胃癌療效的目的。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激被認(rèn)為普遍存在于腫瘤細(xì)胞中,但我們對胃腺癌細(xì)胞在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下,促凋亡和促生存蛋白表達(dá)水平的變化及其表達(dá)的調(diào)控方式知之甚少。了解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)細(xì)胞的生存和凋亡的調(diào)控機(jī)制,對克服腫瘤細(xì)胞的凋亡耐受有重要意義。Nox

2、a屬于BH3-only家族中重要的促凋亡蛋白,和腫瘤發(fā)生、治療密切相關(guān)。本研究利用衣霉素(TM)誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞建立內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡模型,明確Noxa在胃腺癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)的表達(dá)情況,進(jìn)一步探討Noxa在胃腺癌細(xì)胞中促凋亡作用及被調(diào)控機(jī)制。
　　方法:TM處理SGC-7901、BGC-823胃腺癌細(xì)胞株和HEK293人胚腎上皮細(xì)胞。采用PI單染法測定細(xì)胞凋亡率。Westernblot檢測GRP78、caspase-3、caspas

3、e-9、Noxa和Mcl-1蛋白變化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測Noxa、Mcl-1mRNA水平的變化。小干擾RNA(siRNA)技術(shù)特異“沉默”Noxa和Mcl-1基因,Westernblot檢測“沉默”基因后Noxa、Mcl-1蛋白水平的變化,流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡率的變化,Westernblot檢測caspase-3、caspase-9蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:TM處理胃腺癌細(xì)胞后,GRP78表達(dá)升高;TM誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡具

4、有時(shí)間和劑量相關(guān)性,與對照HEK-293細(xì)胞相比,兩株胃腺癌細(xì)胞對衣霉素誘導(dǎo)的凋亡都不敏感;兩株胃腺癌細(xì)胞中caspase-3和caspase-9活化較弱。Noxa和Mcl-1在蛋白水平表達(dá)升高,它們的mRNA水平表達(dá)亦升高。在SGC-7901細(xì)胞中,“沉默”Mcl-1基因后,TM處理細(xì)胞24h細(xì)胞凋亡率為(46.76±1.8)％,caspase-3和caspase-9明顯活化;“沉默”Noxa基因細(xì)胞凋亡率為(6.76±1.5)%,c