PTEN與P27在膀胱移行細胞癌中的表達及其意義.pdf

1、背景和目的；膀胱癌是人類最常見惡性腫瘤之一，其中移行細胞癌(transitionalcellcarcinoma，TCC)約占90％以上。其發(fā)病率在逐年增高，嚴重危害人們的健康。但是，其發(fā)病的確切機制仍未完全闡明。近年來，隨著對腫瘤發(fā)生機制分子生物學方面的深入研究，人們認識到癌基因的激活、抑癌基因的失活以及兩者之間的協同作用導致細胞增殖和凋亡異常，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關。腫瘤被認為是一種基因疾病。PTEN是第一個被發(fā)現具有磷酸酯酶活性的抑

2、癌基因，全稱是與細胞骨架蛋tensin同源在腫瘤第10號染色體丟失的磷酸酶基因，參與細胞增殖過程、轉化、粘附的負性調控。 隨著對細胞周期的研究取得的一些突破性進展，對細胞周期與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展之間關系的認識也不斷加深，細胞增殖的失控是腫瘤組織最顯著的特點。因此，腫瘤也是一類細胞周期疾病。P27是一個新近發(fā)現的抑癌基因，它能與CDK結合并抑制其活性，進而負性調控細胞周期進程，阻滯細胞周期G1由向S期轉換。P27的功能引起了廣泛的關

3、注。 目前國內對PTEN、P27在膀胱癌中表達的相關性研究報道不多，而同時對PTEN和P27在膀胱癌中表達的研究國內尚未見報道，它們與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展，浸潤轉移之間的關系尚不十分清楚。為此，本實驗采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化物酶染色法(S-P法)聯合檢測BTCC與正常組織中PTEN及P27的表達，探討其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用，并分析兩者之間的內在聯系，以期為研究膀胱癌發(fā)生、發(fā)展機理及臨床治療提供實驗依據。

4、材料與方法；1.標本來源收集鄭州大學一附院2004年7月至2005年8月間收治的膀胱移行細胞癌(BTCC)住院患者開放手術切除的膀胱腫瘤標本62例。其中男48例，女14例；年齡34～78歲，平均年齡63.2歲；行膀胱部分切除55例，膀胱全切7例；腫瘤單發(fā)35例，多發(fā)27例；初發(fā)33例，復發(fā)29例。另收集23例正常膀胱組織標本(取自膀胱結石及前列腺增生癥開放手術病人)作為對照。膀胱腫瘤標本病理分級按WHO標準：G122例，G224例，G3

5、16例。臨床分期按UICC-TNM標準：Ta-Tl期37例，T2-T4期25例。 2.實驗方法標本用10％福爾馬林固定，石蠟包埋后4um連續(xù)切片。采用免疫組織化學法(S-P法)測定PTEN，P27蛋白的表達情況，操作按試劑說明書進行。己知前列腺癌陽性片作為陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。 3.結果判定參照文獻資料，PTEN染色判斷標準：染色陽性以細胞漿內有橘黃色或棕黃色顆粒者為標準，隨機選擇10個高倍鏡(×400)

6、視野，根據陽性細胞占同類細胞總數的百分率及細胞染色強度綜合判定。染色強度評分標準：不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。比例評定標準：陽性細胞數＜10％為0分，10％-40％為1分，41％-70％為2分，＞70％為3分。兩種評分相加，0-2分為陰性；3-6分為陽性。P27染色判斷標準：以細胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒作為陽性細胞。高倍鏡下隨機選擇10個高倍視野，計數1000個腫瘤細胞，根據陽性數所占的比例判斷結果：P27

7、陰性：陽性細胞數≤50％，染色強度較淺；P27陽性：陽性細胞數＞50％，染色強度中度以上。 3.統計學分析采用SPSS13.0軟件行統計分析，χ2檢驗進行顯著性檢驗，相關性檢驗采用Spearman等級相關檢驗。以a=0.05為統計學檢驗顯著性水準。 結果；1.PTEN蛋白在BTCC和正常膀胱粘膜的表達結果 ①.PTEN蛋白在正常膀胱粘膜和膀胱移行細胞癌組織中的陽性表達率分別為 100％、46.77％(29

8、/62)差異有顯著性(P＜0.05). ②.PTEN蛋白在G1，G2，G3中的陽性表達率依次為72.73％(16/22)，37.50％(9/24)，25.00％(4/16)，G1與G2或G3相比較，差異有顯著性(P＜0.05)；在Ta-T1中PTEN陽性表達率為64.86％(24/37)，明顯高于T2-T4中的陽性表達率20.00％(5/25)，兩者相比差異有顯著性(P＜0.05)。在淋巴結轉移組，PTEN蛋白陽性表達率為18.

9、75％(3/16)低于無淋巴結轉移組陽性表達率46％(26/46)，兩者比較有統計學意義(P＜0.05)。PTEN的表達隨病理分級、臨床分期的增高而明顯下降。 2.P27蛋白在BTCC和正常膀胱粘膜的表達結果 ①.P27蛋白在正常膀胱粘膜和膀胱移行細胞癌組織中的陽性表達率分別為95.65％(22/23)，43.55％(27/62)，差異有顯著性(P＜0.05)。 ②.P27蛋白在G1，G2，G3中的陽性表達率依次

10、為72.7.％(16/22)，33.33％(8/24)，18.75％(3/16)，組間比較，差異有顯著性(P＜0.05)；在Ta-T1中，P27陽性表達率為62.16％(23/37)，明顯高于T2-T4中的陽性表達率16.00％(4/25)，兩者相比差異有顯著性(P＜0.05)。在淋巴結轉移組，P27蛋白陽性表達率為12.50％(2/16)，顯著低于無淋巴結轉移組的陽性表達率54.35％(25/46)，兩者比較有統計學意義(P＜0.05

11、)。P27的表達隨病理分級、臨床分期的增高而明顯下降。 3.PTEN蛋白和P27蛋白表達缺失與膀胱移行細胞癌腫瘤的數目、患者性別、年齡等情況無明顯相關性，在初發(fā)瘤與復發(fā)瘤中的表達亦無顯著差異(P＞0.05)。4.PTEN與P27相關性分析顯示，二者的表達呈正相關。 結論；1.PTEN蛋白在正常組織中呈現為高表達，在膀胱移行細胞癌呈現低表達，與膀胱癌分化程度、臨床病理分期、浸潤及轉移密切相關。 2.P27蛋白在正常