催產素對大鼠切割疼痛痛覺調制的作用及機制.pdf

1、目的
　　觀察大鼠后足切割后中樞神經(jīng)系統(tǒng)內催產素的變化規(guī)律,腹腔、鞘內和側腦室內給予外源性催產素對大鼠后足切割痛的痛覺調制作用,并用催產素受體阻斷劑atosiban和阿片類受體阻斷劑納洛酮預先阻斷相應受體,研究中樞內催產素痛覺調制作用與這兩種受體間的關系,探討其簡單作用機制。
　　方法
　　1.雄性SD大鼠隨機分為切割痛組和空白對照組,切割痛組按照Brennan1996年介紹的方法建立大鼠后足切割痛模型,空白對照組不做

2、任何處理。切割痛組大鼠在切割后的30min、1h、3h、6h和24h取脊髓腰膨大和腦進行免疫熒光檢測OT、OTR陽性細胞表達,取背角和PVN行Western-blot以及RT-PCR測定,檢測OT、OTR轉錄和蛋白表達變化。
　　2.雄性SD大鼠隨機分為3組:腹腔注射組、鞘內注射組、側腦室注射組;腹腔注射組分為100μl生理鹽水、0.5nmol、1nmol和2.5nmol四個劑量組,鞘內注射組和側腦室注射組分為10μl(5μl)生

3、理鹽水、0.05nmol、0.1 nmol和0.25nmol四個劑量組。腹腔注射組大鼠在注射后的30min、1h、3h、6h、12h、24h,鞘內和側腦室內注射大鼠在注射后的10min、30min、1h、3h、6h、12h、24h進行機械性痛閾測定。
　　3.雄性SD大鼠隨機分為2大組:鞘內注射組、側腦室注射組。每個大組又分為如下小組:①生理鹽水+OT0.05nmol組;②生理鹽水+OT0.1nmol組;③生理鹽水+OT0.25n

4、mol組;④atosiban1.0nmol+OT0.05nmol組;⑤atosiban1.0nmol+OT0.1 nmol組;⑥atosiban1.0nmol+OT0.25nmol組;⑦納洛酮0.5μg+OT0.05nmol組;⑧納洛酮0.5μg+OT0.1nmol組;⑨納洛酮0.5μg+OT0.25nmol組。各組大鼠在切割給藥后的10min、30min、1h、3h、6h、12h、24h進行機械性痛閾測定,檢測其變化情況。
　　

5、結果
　　1.切割痛大鼠與空白對照組大鼠相比,在切割后的30min開始持續(xù)至至少6h PVN內的OT陽性細胞數(shù)量明顯下降,WB顯示在該時間段內PVN內的OT蛋白總量明顯下降,而m RNA卻在切割后的30min至1h內升高;脊髓腰膨大背角Ⅰ、Ⅱ板層內OT陽性細胞數(shù)和蛋白表達量在切割后的30min至6h開始上升,而RT-PCR顯示在脊髓腰膨大處無OT m RNA出現(xiàn);無論切割前后PVN內均未見OTR的表達,而脊髓腰膨大背角Ⅰ、Ⅱ板層內

6、OTR在切割后30min至至少12h表達上升。
　　2.腹腔注射0.5nmol、1nmol或2.5nmolOT對大鼠切割痛足機械痛閾無影響;側腦室內注射0.05nmol、0.1nmol或0.25nmolOT對大鼠切割痛足機械痛閾有劑量依賴性地提高,其持續(xù)時間從給藥后10min至6h;鞘內給藥同樣會使切割痛大鼠產生劑量依賴性機械痛閾增強;側腦室和鞘內注射OT對切割痛的鎮(zhèn)痛作用均有封項作用。
　　3.鞘內和側腦室內預注射atos

7、iban都可以阻斷OT對切割痛的鎮(zhèn)痛作用,且增加OT劑量并不能逆轉該效應;而鞘內和側腦室內預注射納洛酮可以部分阻斷OT的鎮(zhèn)痛作用,OT劑量增加時該阻斷作用減弱,在OT劑量達到0.25nmol時其鎮(zhèn)痛作用再次出現(xiàn)。
　　結論
　　1.切割痛大鼠PVN內OT轉錄增加而蛋白表達減少,脊髓內OT雖無轉錄但蛋白表達增加,表明切割后PVN內合成的OT轉運至脊髓和(或)其他位置發(fā)揮痛覺調制作用。
　　2.無論切割與否大鼠PVN內OT