PTEN在岡田酸誘導SH-SY5Y細胞tau蛋白過度磷酸化中的表達及褪黑素對其作用的研究.pdf

1、目的：以tau蛋白過度磷酸化為反映AD(Alzheimer'sDisease)發(fā)生發(fā)展的關鍵指標，初步探明實驗性AD誘導產(chǎn)生過程中的PTEN表達狀況及其與tau蛋白過度磷酸化的關系，以深化理解AD的發(fā)病機制；探討褪黑素(melatonin，MLT)抗AD樣細胞效應及其與tau蛋白過度磷酸化及PTEN表達的關系，為MLT及其同系物的臨床應用提供理論基礎。 方法：①采用岡田酸(Okadaicacid,OA)誘導SH-SY5Y細胞，以

2、tau蛋白過度磷酸化和細胞活性的變化為觀察指標，建立用于AD研究的細胞模型。②MTT法檢測細胞活性。③Westernblot法測定SH-SY5Y細胞Ser396位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④免疫細胞化學法觀測SH-SY5Y細胞內tau蛋白樣免疫陽性反應物。 結果：①OA孵育SH-SY5Y細胞可顯著降低細胞活性，作用隨著OA濃度的增高和作用時間的延長而增強；40nmol／LOA作用SH-SY5Y細胞不同時間，可見細

3、胞中Ser396位點磷酸化tau蛋白水平于作用后3h開始升高，6h和12h進一步升高，24h達高峰，隨后開始下降，48h的水平仍高于基礎值，提示OA可誘導SH-SY5Y細胞活性下降和tau蛋白過度磷酸化。②40nmol／LOA孵育SH-SY5Y細胞，同時觀測細胞中Ser396位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平隨OA作用時間的變化，可見Ser396位點磷酸化tau蛋白水平變化同上，而PTEN蛋白水平于OA作用后6h、12h高于基礎

4、水平，24h、48h則低于基礎值，提示在OA誘導SH-SYSY細胞tau蛋白過度磷酸化過程中，PTEN表達存在變化。③10lamol／L和100!~mol／LMLT預處理細胞2h，隨后加40nmol／LOA孵育細胞24h，可見MLT預處理組細胞活性顯著高于OA處理組，Ser396位點磷酸化tau蛋白水平明顯低于OA處理組，提示MLT可對抗OA誘導SH-SY5Y細胞活性下降和tau蛋白過度磷酸化。④10gmol／LMLT預處理細胞2h，隨

5、后加40nmol／LOA孵育細胞12h，MLT預處理組細胞PTEN蛋白水平與OA處理組相比未見變化：10~tmol／LMLT預處理細胞2h，隨后加40nmol／LOA孵育細胞24h，MLT預處理組細胞PTEN蛋白水平明顯高于OA處理組，提示MLT對40nmol／LOA作用SH-SY5Y細胞24h所致的PTEN表達減弱可能具有對抗作用。 結論 1．OA可誘導SH-SY5Y細胞活性下降和tau蛋白過度磷酸化，該細胞模型可用于