日本血吸蟲8 kDa鈣結(jié)合蛋白基因的克隆、表達及重組蛋白的純化與免疫反應(yīng)性的評價.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在前期的研究中我們在國內(nèi)外首次構(gòu)建了日本血吸蟲尾蚴cDNA文庫,并用EST策略從文庫中篩選到一個包含完整開放讀碼框的cDNA序列,與曼氏血吸蟲8kDa鈣結(jié)合蛋白(Calcium-binding protein,CBP)基因序列同源性達82﹪,所編碼的蛋白具有2個EF-手的典型的鈣結(jié)合蛋白保守結(jié)構(gòu)域.該研究以所篩到的噬菌粒為模板,利用合成的引物進行PCR擴增.PCR產(chǎn)物(Sj8CaBP基因)片段長度為236bp.回收純化后連接入pMD18

2、-T載體并亞克隆入原核表達質(zhì)粒pET32a(+).重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入BL21細胞,構(gòu)建表達工種菌,并用IPTG誘導工作菌的表達.超聲裂菌,離心后收取上清中的可溶性蛋白.SDS-PAGE分析表達上清液中的蛋白.同時做參照的菌株有BL21空白對照菌及pET32a(+)轉(zhuǎn)化的BL21菌.結(jié)果可見特異性的表達條帶,pET32a(+)質(zhì)粒上的擔體蛋白、Sj8CaBP融合蛋白的分子量分別約為21kDa和29kDa.重組蛋白用Ni-NTA樹脂純化后用

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