可視化裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立及評(píng)價(jià).pdf

1、目的:本研究根據(jù)子宮內(nèi)膜異位癥特性，對(duì)卵巢巧克力囊腫患者的在位及異位子宮內(nèi)膜組織中的內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，并將培養(yǎng)成功的細(xì)胞懸液注射至裸鼠腹部皮下，建立可視化裸鼠子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥模型，并評(píng)價(jià)該方法的成模情況，為進(jìn)一步研究子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)理等提供可靠模型。
　　方法:選取卵巢巧克力囊腫患者的在位及異位子宮內(nèi)膜組織，分離出內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，并將細(xì)胞分為分離組（腺上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞）和混合組，然后觀察各組細(xì)胞的生長(zhǎng)特性，應(yīng)用吉姆

2、薩染色進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)鑒定，同時(shí)應(yīng)用免疫熒光染色進(jìn)行細(xì)胞特異性鑒定（波形蛋白及角蛋白的表達(dá)），最后將200ul不同數(shù)量(1.0×106、2.5×106、5.0×106、1.0×107)的各組細(xì)胞懸液注射至雌性裸鼠（5-6周齡）的腹部皮下，隨后分期觀察裸鼠皮下注射部位的變化，同時(shí)剝離種植的異位病灶制作標(biāo)本，進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察各期病理組織學(xué)形態(tài)，遂對(duì)有腺體生長(zhǎng)的異位病灶進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，進(jìn)一步明確組織細(xì)胞的類(lèi)型，最終比較分析各方法所得模型

3、的成模率及成模時(shí)間。
　　結(jié)果:分離培養(yǎng)的腺上皮細(xì)胞在體外不能傳代，分離培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞及混合培養(yǎng)的各組細(xì)胞均可傳代，混合培養(yǎng)的內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力較分離培養(yǎng)的間質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，混合培養(yǎng)的異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力較在位內(nèi)膜細(xì)胞強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)中觀察到生長(zhǎng)良好的異位病灶呈隆起的囊泡樣結(jié)構(gòu)，表面有血管生成，病理學(xué)證實(shí)其內(nèi)有子宮內(nèi)膜腺體形成，免疫組化結(jié)果確定異位病灶細(xì)胞與人類(lèi)內(nèi)膜細(xì)胞同源;

4、各組在第10天、第15天形成的異位病灶體積與5天時(shí)異位病灶體積比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在第10天與第15天時(shí)形成的異位病灶體積比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同數(shù)量的在位細(xì)胞組模型在第5天、第10天和第15天時(shí)各組間成模率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中細(xì)胞數(shù)量為5.0×106和1.0×107時(shí)的成模率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);不同數(shù)量的異位細(xì)胞組模型在第5天、第10天和第15天時(shí)的成

5、模率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中細(xì)胞數(shù)量為5.0×106和1.0×107時(shí)的成模率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);細(xì)胞數(shù)量為5.0×106/200ul時(shí)，異位細(xì)胞組的成模率高于在位細(xì)胞，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:腺上皮細(xì)胞必須與間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)才能傳代，間質(zhì)細(xì)胞能夠傳代但增殖能力較混合的內(nèi)膜細(xì)胞弱，混合培養(yǎng)的異位內(nèi)膜細(xì)胞較在位內(nèi)膜細(xì)胞增殖能力強(qiáng);應(yīng)用混合培養(yǎng)的第5-6代異位內(nèi)膜細(xì)胞，以