腦膠質(zhì)瘤中NANOG與CD133、GFAP的表達(dá)及其相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)NANOG、CD133、GFAP在體內(nèi)膠質(zhì)瘤組織中的共表達(dá),探討NANOG基因與CD133、GFAP之間的表達(dá)關(guān)系;培養(yǎng)鑒定U87細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞,在體外細(xì)胞系水平上探討NANOG與CD133的共表達(dá)關(guān)系,分析NANOG在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中所起到的作用。
　　方法：(1)采用雙重免疫組化法檢測(cè)NANOG、CD133、GFAP在60例膠質(zhì)瘤組織中的共表達(dá)情況,計(jì)算NANOG+細(xì)胞、CD133+細(xì)胞、GFAP+細(xì)胞、NAN

2、OG+/CD133+細(xì)胞和NANOG+/GFAP+細(xì)胞所占的百分比,并將各陽(yáng)性指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(2)血清剝奪的方法培養(yǎng)U87中膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,觀察細(xì)胞腫瘤球的形成過程;將腫瘤球接種于血清培養(yǎng)基,觀察其在體外的分化特點(diǎn);免疫熒光鑒定血清剝奪后尚存的細(xì)胞、增殖形成的腫瘤球細(xì)胞和分化細(xì)胞。(3)采用雙重免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞球中NANOG和CD133的共表達(dá)情況,分析兩者之間表達(dá)關(guān)系。
　　結(jié)果：(1)在不同病理級(jí)別人腦

3、膠質(zhì)瘤中NANOG+、CD133+和GFAP+細(xì)胞百分比差異有顯著性,并且NANOG+表達(dá)與CD133+表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.904,P<0.001),NANOG+表達(dá)與GFAP+表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.907,P<0.001)。隨著病理級(jí)別的升高,NANOG+/CD133+細(xì)胞百分比差異有顯著性(F=560.805,P<0.001),NANOG+/GFAP+細(xì)胞(F=0.355,P>0.01)百分比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并且NANOG+

4、/CD133+表達(dá)與CD133+表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.823,P<0.001)。(2)應(yīng)用血清剝奪的方法成功地篩選出了表達(dá)CD133的腫瘤干細(xì)胞,并能增殖形成腫瘤球;腫瘤球可多向分化,子代細(xì)胞表GFAP和NSE;雙重免疫細(xì)胞化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)NANOG和CD133在腫瘤干細(xì)胞球中共表達(dá),在干細(xì)胞球周邊呈現(xiàn)半分化狀態(tài)的細(xì)胞僅表達(dá)CD133而未表達(dá)NANOG。
　　結(jié)論：(1)在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中NANOG呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),與腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞標(biāo)記

5、物CD133之間有明顯的相關(guān)性,并且腦腫瘤CD133、NANOG陽(yáng)性細(xì)胞的比率和腫瘤的惡性程度有關(guān),有CD133陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤組織同時(shí)亦表達(dá)NANOG,并且存在細(xì)胞水平上的共表達(dá)。在膠質(zhì)瘤病理分級(jí)中,NANOG+表達(dá)與GFAP+表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。高表達(dá)NANOG的組織,GFAP的表達(dá)水平相對(duì)較低,絕大部分的細(xì)胞沒有NANOG和GFAP共表達(dá),不同病理級(jí)別中NANOG+/GFAP+細(xì)胞百分比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.(2)U87細(xì)胞系中存在具有自