結核分枝桿菌Rv1272和Rv1273蛋白的功能研究.pdf

1、目的：探索結核分枝桿菌Rv1272和Rv1273基因編碼蛋白與藥物外排的關系及研究其物質轉運功能,為探討結核分枝桿菌耐藥分子機制提供實驗支持。
　　 方法：利用生物信息學方法分析Rv1272和Rv1273基因及其編碼蛋白的結構,采用PCR技術擴增這兩個基因,并與pMF406質粒連接構建重組質粒,測序正確后,電穿孔法將重組質粒轉入恥垢分枝桿菌mc2155。同時用pMF406空質粒電轉入mc2155做對照。對這兩個蛋白進行亞細胞定位

2、后,用試管法測定其對常用的九種抗菌藥物的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)。另一方面,用530nm激發(fā)光和590nm散射光,顯示菌體對溴化乙錠(Ethidium bromide,EB)吸收的量,判斷這兩個基因是內排還是外排EB。然后構建菌株pMF-ΔRv1273,進一步驗證這兩個基因的功能。最后通過檢測菌株生長對EB的敏感性,進一步驗證其功能。
　　 結果：經驗證Rv1272

3、和Rv1273為膜蛋白。通過測定發(fā)現(xiàn)與對照菌株相比,含有這兩個基因的重組菌株對所測藥物的MIC無顯著性差異,未發(fā)現(xiàn)膜蛋白Rv1272和Rv1273在重組菌株中對所測藥物的外排作用。與對照菌株相比,菌株pMF406-Rv1272對EB的吸收沒有顯著變化。而菌株pMF406-Rv1273 EB的吸收量遠遠高于對照菌株,菌株pMF-ΔRv1273與對照菌株EB吸收量基本接近。在大腸桿菌和恥垢分枝桿菌中,含有Rv1272和Rv1273重組質粒的