α晶體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞膜結(jié)合的靶蛋白的探索研究.pdf

1、目的:通過(guò)研究外源性α晶狀體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的結(jié)合部位并探索與其作用的靶蛋白，初步探討α晶狀體蛋白促進(jìn)RGCs存活及軸突再生的分子機(jī)制，為視神經(jīng)損傷后的臨床治療和研究提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、外源性α晶體蛋白與大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞結(jié)合的定位研究：通過(guò)蛋白的生物素化技術(shù)對(duì)外源性的α晶狀體蛋白進(jìn)行生物素標(biāo)記后與RGCs孵育，再用免疫組織化學(xué)技術(shù)研究外源性α晶狀體蛋白與RGCs的結(jié)合部位；
　　2、外源性α晶

2、體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞膜受體integrinα6作用關(guān)系的研究：通過(guò)受體結(jié)合位點(diǎn)封閉的原理、免疫組織化學(xué)技術(shù)、蛋白質(zhì)相互作用Pull-Down技術(shù)及免疫印跡實(shí)驗(yàn)，間接和直接驗(yàn)證外源性α晶狀體蛋白是否和RGC-5膜上受體integrinα6有作用關(guān)系；
　　3、應(yīng)用SDS-GAGE電泳及質(zhì)譜的方法對(duì)用Pull-Down技術(shù)捕獲的蛋白進(jìn)行分析。結(jié)果:1.外源性α晶狀體蛋白結(jié)合RGCs的胞膜上；
　　2、α晶狀體蛋白與視網(wǎng)膜神經(jīng)

3、節(jié)細(xì)胞膜受體integrinα6無(wú)作用關(guān)系。
　　3、SDS-GAGE電泳凝膠上有一個(gè)50KD左右的條帶,將其質(zhì)譜分析，結(jié)果中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的評(píng)分大于系統(tǒng)顯著性評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)論:
　　1.外源性α晶狀體蛋白是通過(guò)結(jié)合于RGCs的胞膜上發(fā)揮促進(jìn)其存活及軸突生長(zhǎng)作用的；
　　2.盡管層粘連蛋白-1通過(guò)作用于RGCs上integrinα6有明顯的促進(jìn)軸突生長(zhǎng)的作用，且α晶狀體蛋白可以通過(guò)作用于晶體上皮細(xì)胞上的