細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注的療效觀察以及作用機制的初步研究.pdf

1、本文分兩部分，第一部分：細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注的療效觀察。
　　 目的：觀察細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注（新型DLI）治療異基因造血干細(xì)胞移植（allo-HSCT）術(shù)后急性白血病復(fù)發(fā)患者的療效。
　　 方法：回顧性分析16例allo-HSCT術(shù)后復(fù)發(fā)并接受新型DLI或常規(guī)DLI治療的急性白血病患者的臨床資料，用多參數(shù)微小殘留病檢測系統(tǒng)，包括骨髓形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、實時定量PCR（RQ-PCR）、復(fù)合擴

2、增熒光標(biāo)記短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）-PCR結(jié)合毛細(xì)管電泳、R顯帶或熒光原位雜交（FISH）綜合評價比較新型DLI和常規(guī)DLI療效差異。新型DLI采用干擾素-α聯(lián)合供體淋巴細(xì)胞輸注，常規(guī)DLI為直接輸注單采的供體淋巴細(xì)胞。
　　 結(jié)果：新型DLI組8例，治療時疾病狀態(tài)包括血液學(xué)復(fù)發(fā)（HR）7例，復(fù)發(fā)傾向1例，常規(guī)DLI組8例，治療時疾病狀態(tài)包括HR7例，分子學(xué)復(fù)發(fā)1例。新型DLI組與常規(guī)DLI組的誘導(dǎo)緩解率分別為62.5％vs25

3、％，對HR的誘導(dǎo)緩解率分別為57.14％vs14.28％，誘導(dǎo)緩解中位時間分別為7天vs23天。GVHD發(fā)生率分別為62.5％vs25％，全血細(xì)胞減少發(fā)生率分別為62.5％vs75％。1年總生存率分別為50％vs12.5％。
　　 結(jié)論：單中心小樣本臨床分析結(jié)果顯示，新型DLI治療移植后復(fù)發(fā)急性白血病的誘導(dǎo)緩解率為62.5％，誘導(dǎo)緩解中位時間7天，持續(xù)緩解時間長，是治療移植后復(fù)發(fā)的有效手段，未來有必要進(jìn)一步探索個體化治療策略，針

4、對患者疾病狀態(tài)、復(fù)發(fā)時間及移植類型設(shè)計新型DLI的治療劑量，以最大程度產(chǎn)生GVL效應(yīng)，降低重癥GVHD的發(fā)生，延長患者的無病生存。
　　 第二部分：細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注作用機制的初步研究。
　　 目的：初步探索細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注（新型DLI）可能的作用機制。
　　 方法：1.血細(xì)胞單采法收集經(jīng)G-CSF動員后的外周血干細(xì)胞，F(xiàn)icoll密度梯度離心法分離得到單個核細(xì)胞（MNC），用不同濃度的

5、IFN-α（500U/ml、1000U/ml、2000U/ml、4000U/m1）活化的MNC與SHI-1細(xì)胞系共孵育不同時間（2、3和7天），MTT法檢測IFN-α活化的MNC對SHI-1細(xì)胞系的殺傷效應(yīng)；2.利用SHI-1細(xì)胞系分組實驗，摸索達(dá)到最佳細(xì)胞毒效應(yīng)的時間和細(xì)胞因子濃度節(jié)點，應(yīng)用FCM檢測IFN-α對淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（DC）免疫表型的影響；3.收集4例移植后復(fù)發(fā)患者接受新型DLI治療前后的外周血，F(xiàn)CM檢測治療前后的外

6、周血中淋巴細(xì)胞亞群及淋巴細(xì)胞表面活化標(biāo)志的變化。
　　 結(jié)果：1-IFN-α能增強MNC對SHI-1的殺傷效率，高濃度IFN-α（4000U/ml）在作用時間為2天和3天時，即能顯著增強MNC對SHI-1的殺傷效應(yīng)，當(dāng)作用時間延長至第7天時，常規(guī)濃度（1000U/ml）亦能顯著增強MNC對SHI-1的殺傷效率；2.達(dá)到最佳細(xì)胞毒效應(yīng)的IFN-α濃度為4000U/ml，作用時間為3天，經(jīng)過IFN-α培養(yǎng)3d的MNC，CD3+CD4

7、+細(xì)胞比例升高，淋巴細(xì)胞活化標(biāo)志CD69表達(dá)升高，DC表面成熟標(biāo)志不同程度升高；3.治療有效的2例患者在治療前后CD3+細(xì)胞、CD3+CD4+細(xì)胞、CD3+CD8+細(xì)胞均維持在穩(wěn)定水平，而治療無效的2例患者均出現(xiàn)不同程度的下降。治療有效的患者均出現(xiàn)淋巴細(xì)胞活化標(biāo)志HLA-DR表達(dá)升高。4例患者治療前后NK細(xì)胞、CD4+CD25+細(xì)胞、Tγδ細(xì)胞均未見明顯變化。
　　 結(jié)論：1.體外細(xì)胞系實驗證實，經(jīng)過7天的共孵育，高濃度和低濃度