黃芪對壓力致兔纖維環(huán)細胞損傷的保護作用.pdf

1、目的：①比較持續(xù)氣壓靜壓力與白介素-1β（IL-1β）誘導藻酸鹽凝膠培養(yǎng)兔纖維環(huán)細胞損傷模型的效果。②探討黃芪對壓力損傷的兔纖維環(huán)細胞增殖、凋亡及細胞質(zhì)骨架微絲結構的影響。
　　 方法：構建體外兔纖維環(huán)細胞凝膠三維培養(yǎng)模型，①將其分入5組：A組（設為空白對照組），B組（IL-1β10ng·mL-1，干預24h），C組（IL-1β10 ng·mL-1，干預48h），D組（1Mpa氣壓靜壓力，持續(xù)24h），E組（1Mpa氣壓靜壓力，

2、持續(xù)48h）。CCK-8法及Annexin V-PI染色檢測細胞增殖及凋亡情況；RT-PCR法檢測I、II型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）和組織金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）表達情況。②將細胞分為5組，以1Mpa持續(xù)氣壓靜壓力誘導纖維環(huán)細胞損傷，在培養(yǎng)基內(nèi)分別加入10、50、100、500、1000μg·mL-1的黃芪注射液。培養(yǎng)48h后CCK-8法檢測細胞增殖情況，Annexin V-PI染色檢測細胞凋亡情況；同時將細

3、胞在無壓力損傷條件下，平面培養(yǎng)24小時，綠色微絲熒光探針顯示細胞質(zhì)微絲的結構。
　　 結果：持續(xù)壓力與IL-1β誘導纖維環(huán)細胞損傷模型比較：①兩種方法均能使纖維環(huán)細胞增殖減緩及凋亡增加，在D、E兩組中這種作用更為明顯；②RT-PCR結果顯示，兩種方法均使得I、II型膠原表達減弱，其中E組較A組II型膠原表達下降大約75％（p<0.01），最為顯著；隨著干預時間的延長，兩種方法均使MMP-3的表達增強；兩種損傷模型中，TIMP-1

4、表達在干預24h后均出現(xiàn)降低，而干預48h后又有所回升。黃芪對壓力致?lián)p傷的纖維環(huán)細胞作用：① CCK-8顯示，上述各濃度的黃芪注射液能促進纖維環(huán)細胞的增殖，其中50μg·mL-1黃芪注射液的作用最顯著（與空白對照相比p<0.01）② Annexin V-PI染色顯示，50μg·mL-1黃芪注射液降低纖維環(huán)細胞凋亡率的作用最為顯著（與空白對照相比p<0.01），但當濃度增加至1000μg·mL-1時，凋亡率雖較空白對照有所降低，但沒有統(tǒng)計