黃岑苷對大鼠腎臟缺血再灌注損傷保護作用及機制研究.pdf

1、背景:缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)過程導致腎臟移植中不可避免的急性損傷。再灌注后的炎癥反應和繼發(fā)的腎小管上皮細胞凋亡，是該損傷中重要的病理生理變化。作為從中國傳統(tǒng)中藥黃岑中提取的一種結構已知的有效成分，黃岑苷(baicalin，B)已被證明具有多種生物學保護作用，如抗病毒，抗感染，抗炎，抗凋亡等，并已在臨床上廣泛應用。但目前尚無實驗證實黃岑苷在腎臟缺血再灌注損傷中的保護作用及機制。本實驗通過大鼠腎臟IR模

2、型探討黃岑苷對腎臟缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)的保護作用及其機制。
　　方法:雄性Wistar大鼠200-250g共30只，隨機分為五組，每組六只，包括假手術組（Sham組），缺血再灌注損傷組（IR組），以及低劑量黃岑苷處理組(1mg/kgB組)、中等劑量黃岑苷處理組（10mg/kg B組）、大劑量黃岑苷處理組(100mg/kgB組)。Wistar大鼠通過右側腎臟切除，左側腎蒂夾

3、閉45分鐘再開放建立腎臟IRI模型。Sham組僅進行開腹關腹操作，IR組僅建立腎臟IRI模型，各黃芩處理組在建立腎臟IRI模型基礎上加不同劑量黃岑苷治療。黃岑苷溶于生理鹽水后在腎蒂夾閉前30分鐘時行腹腔注射，黃芩苷劑量分別為1mg/kg、10mg/kg和100mg/kg。術后24小時處死大鼠，留取血液、腎組織福爾馬林固定標本、腎組織液氮冰凍標本。其中血標本行腎功能檢測（肌酐與尿素氮），腎臟福爾馬林固定標本行組織切片HE染色及TUNEL檢

4、測，腎臟冰凍標本提取蛋白及RNA，分別行caspase3活性檢測、western blot蛋白表達檢測、實時定量PCR檢測。其中蛋白檢測指標包括caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、bcl-2、bax、NF-κB、IκB、磷酸化NF-κB、磷酸化IκB，RNA檢測指標包括IL-1β、IL-6及TNF-α的信使RNA。
　　結果:與IR組相比，10mg/kg B組及100mg/kg B組腎臟功能

5、明顯改善，肌酐(79.67±8.71μmol/L,47.17±6.05μmol/L,39.00±6.16μmol/L，均p＜0.001)及尿素氮（22.37±3.87mmol/L，16.18±0.71 mmol/L，12.15±0.78 mmol/L，分別p＜0.01和p＜0.001）均顯著下降。該兩組腎組織HE染色與IR組相比可見腎臟損傷程度明顯減輕，僅有少量管型，輕度炎癥反應及小管水腫，HE評分有統(tǒng)計學差異（2.83±0.12，2.

6、58±0.12，2.32±0.17，分別p＜0.01和p＜0.001）。TUNEL檢測示兩組小管上皮細胞凋亡數較IR組明顯減少，半定量分析見統(tǒng)計學差異（6.75±0.91，3.87±0.67，3.43±0.85，均p＜0.001）。對炎癥相關指標進行檢測，實時定量PCR結果示該兩組黃岑苷治療后IRI相關炎癥因子IL-1β(55.35±4.12,19.03±0.95,12.27±1.50，均p＜0.001), IL-6(24.92±5.8

7、0,4.29±0.59,3.08±0.61，均p＜0.001), TNF-α(18.73±4.49,1.67±0.23,1.75±0.41，均p＜0.001)表達顯著降低;western blot結果進一步證明重要炎癥反應通路NF-κB通路被抑制，磷酸化蛋白NF-κ B及磷酸化蛋白IκB水平明顯降低。對凋亡相關指標進行檢測，該兩組caspase-3活性顯著降低(0.33±0.02,0.25±0.01,0.22±0.01，均p＜0.001

8、)，蛋白caspase-3、cleavedcaspase-3、bax表達減少，蛋白bcl-2表達增加。
　　結論:黃岑苷對大鼠腎臟IRI具有顯著保護作用。該作用與黃岑苷減輕IRI相關炎癥因子表達及抑制腎小管上皮細胞凋亡有關。NF-κB信號通路作為腎臟IRI中重要的炎癥激活通路，在黃岑苷處理后被明顯抑制。線粒體相關凋亡作為腎臟IRI中腎小管上皮細胞凋亡的主要途徑，在黃岑苷處理后也得到明顯抑制。因此黃岑苷對大鼠缺血再灌注損傷的保護作用