脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒pEGFP-N1轉(zhuǎn)染對(duì)小鼠睪丸生精功能的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染法，結(jié)合顯微注射向昆明（KM）小鼠睪丸曲細(xì)精管內(nèi)導(dǎo)入外源質(zhì)粒pEGFP-N1，評(píng)價(jià)脂質(zhì)體DATAP對(duì)睪丸生精功能的影響以及其介導(dǎo)質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染的效率。為下一步向睪丸內(nèi)導(dǎo)入與精子形成有關(guān)的基因，闡明這種導(dǎo)入基因?qū)ιδ艿挠绊懀瑥亩接懮倬?、弱精的男性不育患者在基因治療方面的可行性?br>　　 方法：將8-10周雄性KM小鼠75只隨機(jī)分成3組，第一組（A 組，n=25），運(yùn)用顯微注射法，向雙側(cè)睪丸曲細(xì)精管內(nèi)

2、注射脂質(zhì)體DOTAP/質(zhì)粒pEGFP-N1；第二組（B 組，n=25），向睪丸曲細(xì)精管內(nèi)注射質(zhì)粒pEGFP-N1；第三組（C 組，n=25），向睪丸曲細(xì)精管內(nèi)注射PBS緩沖液。分別于術(shù)后1、2、4、6、8周頸椎脫臼處死小鼠，取出睪丸和附睪，睪丸行冰凍切片，常規(guī)HE 染色，JS 計(jì)數(shù)（JS）評(píng)分法評(píng)估睪丸生精功能；脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP 的缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測(cè)睪丸生殖細(xì)胞凋亡，并計(jì)算凋亡指數(shù)（AI）；熒光顯微鏡

3、觀察質(zhì)粒pEGFP-N1 導(dǎo)入后的轉(zhuǎn)染效率；附睪精子行精液分析。
　　 結(jié)果：三組KM小鼠曲細(xì)精管顯微注射后JS 評(píng)分提示睪丸生精功能下降，4周后達(dá)到最低，隨后生精功能開(kāi)始恢復(fù)，8周后達(dá)到正常，三組之間JS計(jì)數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TUNEL 檢測(cè)細(xì)胞凋亡，三組中均4周后凋亡細(xì)胞最多，8周后恢復(fù)正常，三組之間AI 指數(shù)比較亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。熒光顯微鏡下觀察各組睪丸冰凍切片均未見(jiàn)綠色熒光。
　　 結(jié)論：脂質(zhì)體DOTAP本身對(duì)小鼠