竹節(jié)參皂苷Ⅴ對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠肝臟及巨噬細(xì)胞系炎癥的保護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:利用LPS建立小鼠肝臟炎癥和RAW264.7巨噬細(xì)胞系炎癥模型,研究竹節(jié)參皂苷Ⅴ的保護(hù)作用并探索其抗炎作用機(jī)制。
　　方法:
　?、倜鱈PS刺激小鼠炎癥模型用藥劑量及時(shí)間,采用竹節(jié)參皂苷Ⅴ保護(hù)小鼠后,檢測(cè)小鼠肝臟指數(shù)及小鼠肝臟功能指標(biāo)。
　?、谛∈蟾闻KHE染色觀察小鼠肝臟形態(tài)學(xué)變化。
　　③采用MTT比色法,觀察竹節(jié)參皂苷Ⅴ對(duì)RAW264.7細(xì)胞的有效濃度范圍。
　?、懿捎肎reiss試劑檢測(cè)NO的

2、釋放,確定LPS刺激RAW264.7細(xì)胞的最佳刺激濃度及時(shí)間,并觀察竹節(jié)參皂苷Ⅴ對(duì)LPS致RAW264.7細(xì)胞釋放NO的保護(hù)作用。
　?、軪lisa技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清及小鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平;RT-PCR法檢測(cè)小鼠肝臟及巨噬細(xì)胞iNOS、TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)及細(xì)胞CD14和TLR4 mRNA表達(dá)水平。
　　⑥Western Blot技術(shù)檢測(cè)小鼠肝臟及細(xì)胞NF-κBp65、P-ERK、P-JNK和P

3、-p38等蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　①竹節(jié)參皂苷Ⅴ能降低LPS引起的小鼠肝功能指標(biāo)以及肝臟指數(shù)。
　　②竹節(jié)參皂苷Ⅴ能改善LPS所致小鼠的肝臟炎癥損傷。
　?、壑窆?jié)參皂苷Ⅴ對(duì)RAW264.7活力沒有影響。
　?、艹鹾Y結(jié)果表明LPS能顯著提高RAW264.7細(xì)胞NO量的釋放,當(dāng)LPS濃度為1μg/mL時(shí),NO釋放量與正常組有顯著性差異。竹節(jié)參皂苷Ⅴ對(duì)LPS致RAW264.7細(xì)胞NO量的釋放有顯著的降低

4、作用。
　?、葜窆?jié)參皂苷Ⅴ對(duì)LPS致小鼠肝炎及細(xì)胞中iNOS、TNF-α、IL-1β的釋放有顯著的抑制作用,且細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中竹節(jié)參皂苷Ⅴ對(duì)CD14和TLR4 mRNA表達(dá)也有抑制效果。
　?、拗窆?jié)參皂苷Ⅴ能顯著降低組織中NF-κBp65、P-ERK、P-p38、P-JNK蛋白的表達(dá)量及細(xì)胞中NF-κBp65、P-ERK、P-JNK蛋白的表達(dá),但在巨噬細(xì)胞中對(duì) P-p38無明顯作用。
　　結(jié)論:竹節(jié)參皂苷Ⅴ具有良好的抗炎效果