高尿酸激活AMPK信號抑制大鼠胰島β細胞胰島素分泌.pdf

1、背景：
　　近年來隨著我國人民生活水平的不斷提高，高尿酸血癥的患病率也呈現(xiàn)逐年升高的趨勢。高尿酸血癥已經(jīng)越來越受到人們的關注。高尿酸血癥是痛風的病理生理基礎，同時也是代謝綜合征的重要組成部分。在一些流行病學的研究中，高尿酸血癥不僅與痛風相關，而且和高血壓，心臟功能損害等心血管疾病密切相關，同時和肥胖、血脂異常、糖代謝紊亂等也存在關聯(lián)。現(xiàn)已有報道，高尿酸抑制胰島β細胞胰島素分泌，但其具體分子機制尚不明確。本實驗室前期研究已經(jīng)證實高尿

2、酸可以通過激活AMPK和ERK信號途徑抑制胰島β細胞的增殖，但是高尿酸是否也通過這些途徑抑制胰島β細胞胰島素分泌需要進一步研究。
　　目的：
　　研究高尿酸調(diào)節(jié)胰島β細胞胰島素分泌的分子機制，闡明高尿酸抑制胰島β細胞胰島素分泌的分子信號途徑，為高尿酸血癥合并胰島素抵抗的治療提供可能的理論。
　　方法：
　　1.大鼠胰島β細胞株INS-1細胞接種于24孔板，正常培養(yǎng)(RPMI1640,10％FBS)48h后，用不同

3、濃度（0、5、10、15mg/dl）尿酸作用細胞90min，取細胞上清液，用ELISA方法測定胰島素濃度。
　　2.細胞接種于24孔板，正常培養(yǎng)48h后，不同濃度丙磺舒（1、2、4mM/L）預處理60min，尿酸作用90min，取細胞上清，ELISA方法測定胰島素濃度。
　　3.細胞接種于6孔板，待融合度到50-60%時候開始加藥，NAC（1mM）預處理12h丙磺舒(2mM)預處理1h,尿酸作用90min,流式細胞儀檢測RO

4、S水平。細胞接種于24孔板，正常培養(yǎng)48h后，不同濃度（200uM、1mM、10mM）NAC預處理12h,尿酸作用90min，取細胞上清，ELISA方法測定胰島素濃度。
　　4.細胞接種于24孔板，正常培養(yǎng)48h后，不同濃度（2、5、10uM）Compoud C預處理8h,尿酸作用90min，取細胞上清，ELISA方法測定胰島素濃度。細胞接種6cm細胞皿，正常培養(yǎng)48h，蛋白免疫印跡（Western Blot）方法檢測尿酸及AMP

5、K抑制劑對胰島β細胞AMPK磷酸化的影響。
　　5.細胞接種于24孔板，正常培養(yǎng)48h后，PD98059（20uM）預處理1h,尿酸作用90min，取細胞上清，ELISA方法測定胰島素濃度。
　　6.細胞接種于24孔板，正常培養(yǎng)48h后，用不同濃度（10uM、20uM、40uM）AKT抑制劑試劑預處理2h,尿酸作用90min，取細胞上清，ELISA方法測定胰島素濃度。
　　結果：
　　1.高尿酸抑制胰島β細胞胰島