胰島素對3T3-L1脂肪細胞HDL生成相關(guān)功能蛋白ABCA1的影響及機制研究.pdf

1、背景與目的：動脈粥樣硬化性心血管疾病是導致人類死亡的首要原因。而血脂異常是其最主要的危險因素之一。盡管他汀類藥物的有效使用，甚至是劑量的加倍，且當 LDL-C降至70mg/dL以下時，心血管剩余風險仍然存在。因此，為了更進一步降低心血管剩余風險，人們逐漸又開始了對其他影響心血管疾病風險因素的探索，如HDL-C。高胰島素血癥/胰島素抵抗是動脈粥樣硬化性心血管疾病的主要危險因素。HDL水平的降低常是高胰島素血癥最主要血脂譜改變之一，但其具體

2、機制仍不明確。本研究以3T3-L1脂肪細胞為研究對象，旨在討論高胰島素環(huán)境對HDL生成相關(guān)功能蛋白ABCA1的影響，并且探索其具體信號通路機制，為心血管剩余風險的干預提供新的基礎醫(yī)學證據(jù)。
　　方法：本實驗以3T3-L1前脂肪細胞為研究對象，通過“雞尾酒法”誘導分化為成熟的脂肪細胞；予以不同濃度的胰島素（0 nmol/L、10 nmol/L、102nmol/L、103nmol/L）刺激，利用葡萄糖氧化酶法（GOD）檢測細胞培養(yǎng)基剩

3、余葡萄糖含量以確定是否成功建立胰島素抵抗模型；利用液體閃爍計數(shù)技術(shù)檢測細胞3H標記膽固醇流出；采用SYBR Green I嵌合熒光法通過實時熒光定量技術(shù)檢測不同濃度的胰島素對3T3-L1成熟脂肪細胞ABCA1 mRNA表達的影響；利用Western blot技術(shù)檢測胰島素對3T3-L1成熟脂肪細胞ABCA1蛋白表達的影響及相關(guān)機制研究。
　　結(jié)果：1.與對照組相比，胰島素濃度為103 nmol/L條件下，細胞培養(yǎng)基上清剩余葡萄糖增

4、多（P<0.01），提示胰島素抵抗模型建立。
　　2.胰島素能呈濃度和時間依賴性抑制3T3-L1脂肪細胞膽固醇的流出（P<0.05）。
　　3.不同濃度的胰島素對ABCA1 mRNA的調(diào)控無影響（P>0.05）。
　　4.胰島素能呈濃度和時間依賴性下調(diào)ABCA1蛋白的表達（P<0.05）。
　　5.胰島素是通過calpain或proteasome途徑促進ABCA1蛋白降解。
　　6.胰島素能呈濃度依賴性促進