槲皮素對(duì)高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　 探討槲皮素(Que)對(duì)高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡以及GRP78、Caspase-12表達(dá)的影響。
　　 [方法]
　　 取新生24h SD大鼠的海馬并用消化法分離出海馬神經(jīng)元，密度梯度離心及差速貼壁法純化，采用NSE蛋白免疫熒光鑒定。
　　 神經(jīng)元培養(yǎng)至第3天，在DMEM完全培養(yǎng)基中加入50mmol/L葡萄糖(Glu)，并分別加入0.5、1.25、2.5、5、7.5、10、20、100

2、umol/L Que，干預(yù)72h，采用MTT比色法探索Que對(duì)高糖條件下海馬神經(jīng)元的適宜作用濃度后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組，在高糖培養(yǎng)基中分別加入2.5、5、7.5umol/L Que及10μmol/L Z-VAD-FMK(ZVAD)，干預(yù)72h，采用MTT比色法觀察各組神經(jīng)元的活性變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)神經(jīng)元凋亡，Western Blotting檢測(cè)GRP78、Caspase-12蛋白的表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 1.經(jīng)鑒定海馬

3、神經(jīng)元純度達(dá)95％以上。
　　 2.MTT比色法實(shí)驗(yàn)結(jié)果:干預(yù)72h時(shí)高糖組及不同濃度的Que各組OD值均呈下降趨勢(shì)，且與正常對(duì)照組比較均明顯降低(P＜0.01);其中Q5(5umol/L)和Q7.5(7.5umol/L)組OD值顯著高于高糖組(P＜0.05)，與ZVAD組OD值比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果:與正常對(duì)照組相比，高糖組、Que三組及ZVAD組的神經(jīng)元凋亡率明顯增加(P＜0

4、.01);與高糖組相比，ZVAD組和Que各組神經(jīng)元凋亡率均明顯下降(P＜0.01，P＜0.05);其中Q5、Q7.5組與ZVAD組的神經(jīng)元凋亡率經(jīng)比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4.Western Blotting檢測(cè)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較，高糖組、ZVAD組及Que各組GRP78和Caspase-12表達(dá)均明顯增加(P＜0.01);與高糖組比較，Que各組的GRP78和Caspase-12的表達(dá)顯著下降(P＜0.0

5、1)，其中Q5和Q7.5兩組下降尤為顯著，且兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05); Q5、Q7.5組和ZVAD組抑制Caspase-12表達(dá)的作用比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.50mmol/L高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元72h，可抑制海馬神經(jīng)元的活性，促進(jìn)海馬神經(jīng)元的凋亡，同時(shí)使GRP78、Caspase-12的表達(dá)增強(qiáng)。
　　 2.槲皮素提高高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元活性，抑制海馬神經(jīng)元凋亡，其

6、作用與Z-VAD-FMK相似。在槲皮素抑制海馬神經(jīng)元凋亡的情況下，GRP78、Caspase-12表達(dá)均下降，提示槲皮素的上述作用機(jī)制可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。
　　 [創(chuàng)新點(diǎn)]
　　 從細(xì)胞和分子水平，觀察高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78和caspase-12表達(dá)的變化，探索槲皮素對(duì)高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡、GRP78和Caspase-12表達(dá)的影響。經(jīng)國內(nèi)外文獻(xiàn)檢索，未見高糖對(duì)體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元GRP7