丹參注射液對宮內(nèi)感染-炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化癥SYP、GAP-43表達(dá)的影響.pdf

1、　　目的：觀察丹參注射液對宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化癥突觸素(SYP)和神經(jīng)生長相關(guān)蛋白(GAP-43)表達(dá)的影響,探討活血化瘀藥物改善宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)腦損傷的機制,提出宮內(nèi)感染/炎癥致腦白質(zhì)軟化癥的中醫(yī)藥治療可以從瘀論治的新理論。
　　方法：( 1 )動物模型制備：24 只孕第 16 天的脂多糖(LPS)組大鼠予LPS350μg/kg·d,連續(xù)兩天腹腔注射,6 只孕鼠于孕第 16 天予等劑量生理鹽水腹腔注射

2、,連續(xù)兩天作為對照組。孕21天前分娩的仔鼠為早產(chǎn)仔鼠。記錄兩組孕鼠的分娩時間及出生體重,觀察新生仔鼠的行為活動。仔鼠出生后即刻隨機選 LPS組和對照組孕鼠各 4 只取子宮和胎盤 HE 染色觀察宮內(nèi)感染情況,判斷標(biāo)準(zhǔn)為大量中性粒細(xì)胞浸潤。隨機選 LPS 組和對照組仔鼠各 10 只斷頭取腦 HE 染色,觀察腦室周圍白質(zhì)損傷情況。(2)隨機選 LPS 組孕鼠早產(chǎn)仔鼠 40 只,隨機分為 4組,每組10只。分別為：丹參注射液高劑量組( A),丹

3、參注射液低劑量組( B),神經(jīng)節(jié)苷脂組(C),模型組(D)。隨機選對照組孕鼠足月仔鼠 10只,為正常對照組(E)。5組大鼠同等條件下喂養(yǎng)。干預(yù)方法：LPS組孕鼠仔鼠每組隨機選取 10只,于生后第 8天給予干預(yù)。A組予丹參注射液高劑量 9ml/㎏·d,B組予丹參注射液低劑量4.5ml/㎏·d,C組予單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉注射液6mg/㎏·d,D組予生理鹽水 9ml/㎏·d,E 組予生理鹽水 9ml/㎏·d,均腹腔注射,連續(xù) 7 天。隨

4、后同條件繼續(xù)喂養(yǎng)至 21日齡。(3)21日齡時對5組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測試(采用懸吊試驗、斜坡試驗、Cylinder試驗),并取腦組織采用免疫組化方法對 SYP、GAP-43進(jìn)行測定。
　　結(jié)果：(1) LPS組24只孕鼠中6只孕鼠分娩前死亡,13只孕鼠娩出早產(chǎn)仔鼠79只,死產(chǎn)仔鼠41只,余5只足月順利生產(chǎn),娩出足月仔鼠 49只,死產(chǎn)仔鼠5只,剔除足月鼠；對照組6只孕鼠均足月順利生產(chǎn),孕鼠無提前分娩及死亡,共娩出活產(chǎn)足月仔鼠5

5、7只,無死產(chǎn)仔鼠；與正常對照組仔鼠相比,LPS組仔鼠出生時皮膚顏色紫紺、體重低、活動少；LPS 組子宮及胎盤病理 HE 染色見大量中性粒細(xì)胞浸潤,說明模型組孕鼠存在宮內(nèi)感染；LPS組仔鼠腦組織白質(zhì)結(jié)構(gòu)稀疏,膠質(zhì)細(xì)胞聚集,可見出血改變。(2) 于21日齡行為學(xué)測試,3種方法行為學(xué)測試,結(jié)果：藥物干預(yù)組與模型組相比,藥物干預(yù)組仔鼠反應(yīng)快,四肢活動靈活,懸吊時上肢抓握時間較長,在斜坡停留時間短,后足站立時前足觸壁次數(shù)百分比值較高,而模型組仔鼠

6、反應(yīng)遲鈍,四肢活動不如干預(yù)組,懸吊時上肢抓握時間短,在斜坡上停留時間長,后足站立時前足觸壁次數(shù)百分比值較低,兩組之間差異有極顯著意義(P<0.01)；藥物干預(yù)組與正常對照組相比,正常對照組反應(yīng)較快,兩組之間差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；藥物干預(yù)組中丹參高劑量組與神經(jīng)節(jié)苷脂組相比,兩組仔鼠反應(yīng)均快,四肢活動靈活,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；藥物干預(yù)組中丹參高劑量組與丹參低劑量組相比,兩組仔鼠均反應(yīng)快,活動靈活,

7、兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；藥物干預(yù)組中神經(jīng)節(jié)苷脂組與丹參低劑量組相比,兩組仔鼠四肢活動均靈活,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(3)丹參注射液干預(yù)治療后使宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化癥中SYP、GAP-43陽性表達(dá)均增加。SYP、GAP-43結(jié)果：藥物干預(yù)組與模型組相比,藥物干預(yù)組對宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化中SYP、GAP-43陽性表達(dá)較模型組增多,兩組之間差異有極顯著意義(

8、P<0.01)；藥物干預(yù)組與正常對照組相比,正常對照組中 SYP、GAP-43 陽性表達(dá)較藥物干預(yù)組增多,兩組之間差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；藥物干預(yù)組中丹參高劑量組與神經(jīng)節(jié)苷脂組相比,兩組仔鼠經(jīng)藥物干預(yù)后腦組織 SYP、GAP-43 均增多,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；藥物干預(yù)組中丹參高劑量組與低劑量組相比,兩組仔鼠 SYP、GAP-43 陽性表達(dá)均增多,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；藥物

9、干預(yù)組中神經(jīng)節(jié)苷脂組與丹參低劑量組相比,兩組仔鼠 SYP、GAP-43陽性表達(dá)均增多,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：(1)丹參注射液對宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化癥仔鼠行為學(xué)方面具有明顯的改善作用。(2)丹參注射液對宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化癥的作用機制,可能與上調(diào)SYP、GAP-43的表達(dá)有關(guān)。(3)宮內(nèi)感染/炎癥致早產(chǎn)仔鼠腦室周圍白質(zhì)軟化癥的中醫(yī)病理機制主要是―血瘀‖的